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lhazrael

木虫 (正式写手)

[求助] 液体培养丝状真菌扫描电镜制片

我想做一下液体培养丝状真菌的扫描电镜。
     实验室的人都是做细菌的,他们是把菌液滴在盖玻片上,等菌液干后加戊二醛固定,然后漂洗,梯度脱水再干燥。我按照他们的方法固定后漂洗的时候菌丝老是浮起来洗丢掉。而且再盖玻片上操作也比较麻烦。想用离心的方法,就是加试剂处理后离心,可是菌丝根本离不下来,14000转都不行,想问一下各位高手:
    怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来?
    干燥后再加戊二醛固定菌不就失水变形了吗?
    漂洗的时候用水还是缓冲液呢?用水的话菌丝应该很容易变形吧?怎样尽量保持菌的形态不变?

[ Last edited by lhazrael on 2012-6-14 at 12:32 ]
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zdzcqums

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


lhazrael: 金币+1, 有帮助, 问的是真菌... 2012-06-17 14:18:14
盖玻片上最好覆一层Formar 膜,或者简单一点镀一层很薄的金箔,这样细胞或细菌容易附着,在后续的处理中不易脱落。把浓度适中的用培养液悬浮吹散的细菌滴在该薄片中央,注意不能散开到盖玻片边缘,使细菌自然沉降0.5~1小时,然后再缓慢从容器边缘加入戊二醛固定液至淹没盖玻片,固定半小时后进行后续处理即可。
14楼2012-06-17 13:55:52
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zdzcqums

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lhazrael: 金币+2, 有帮助, 谢谢啦 2012-06-18 17:32:06
引用回帖:
15楼: Originally posted by lhazrael at 2012-06-17 14:15:05
麻烦再问一下,我同时也做了固体平板上的电镜制片。按文献讲的:从菌落上切琼脂块薄片,然后固定脱水等等。我做完干燥之后,发现薄片不再是平的,变卷曲了,想问下还能用吗?扫描电镜的样品是否必须是平的?
以前没 ...

扫描电镜主要是观察物体的表面的,只要你的观察对象暴露在表面,就可以观察。只要把有细菌的那一面暴露出来就行。
16楼2012-06-18 08:44:44
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