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lhazrael

木虫 (正式写手)

[求助] 液体培养丝状真菌扫描电镜制片

我想做一下液体培养丝状真菌的扫描电镜。
     实验室的人都是做细菌的,他们是把菌液滴在盖玻片上,等菌液干后加戊二醛固定,然后漂洗,梯度脱水再干燥。我按照他们的方法固定后漂洗的时候菌丝老是浮起来洗丢掉。而且再盖玻片上操作也比较麻烦。想用离心的方法,就是加试剂处理后离心,可是菌丝根本离不下来,14000转都不行,想问一下各位高手:
    怎样固定住才能使加液体时菌丝不再飘起来?
    干燥后再加戊二醛固定菌不就失水变形了吗?
    漂洗的时候用水还是缓冲液呢?用水的话菌丝应该很容易变形吧?怎样尽量保持菌的形态不变?

[ Last edited by lhazrael on 2012-6-14 at 12:32 ]
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zdzcqums

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


lhazrael: 金币+1, 有帮助, 问的是真菌... 2012-06-17 14:18:14
盖玻片上最好覆一层Formar 膜,或者简单一点镀一层很薄的金箔,这样细胞或细菌容易附着,在后续的处理中不易脱落。把浓度适中的用培养液悬浮吹散的细菌滴在该薄片中央,注意不能散开到盖玻片边缘,使细菌自然沉降0.5~1小时,然后再缓慢从容器边缘加入戊二醛固定液至淹没盖玻片,固定半小时后进行后续处理即可。
14楼2012-06-17 13:55:52
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lhazrael

木虫 (正式写手)

急啊,高手帮忙啊
2楼2012-06-14 14:52:54
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我爱文字

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
真菌需要用乳酸棉兰染色,显微照相才能看的清楚。不知道你的真菌是在固体培养基上培养的,还是震荡培养的?
3楼2012-06-14 15:05:00
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lhazrael

木虫 (正式写手)

我是要做电镜,振荡培养
4楼2012-06-14 15:05:49
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