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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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liouwzh

木虫 (正式写手)

[求助] 请问如何将序列重复拷贝数倍增后连接

现有一序列,约350bp左右,想使此片段重复5次后连接成1750bp长度左右的片段,连接时不要出现酶切位点等接头,有没有什么好的方法?如果用重叠PCR是否可行。
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liouwzh

木虫 (正式写手)

都没人知道吗?
2楼2012-06-26 15:59:26
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liuhedong1817

木虫 (正式写手)

hello

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励用作 2012-09-03 13:42:52
小丹木木: 不好意思,操作失误,是鼓励应助 2012-09-03 13:43:28
可以的啊,只是比较麻烦,重叠PCR先获得两倍DNA,其中有一倍DNA,需要电泳回收,然后获得四倍DNA,同样,其中有两倍DNA,电泳回收后,再做一次重叠pCR,就可以得到5倍的DNA了!另外,我想请教您一个问题,呵呵,我最近要做CO差光谱法分析血红蛋白,我想知道你们是怎么用一氧化碳处理细胞破碎液上清的,将一氧化碳通入液体中的时候,要做什么防护吗?谢谢你了
老婆的头像
3楼2012-08-31 15:17:59
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liouwzh

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuhedong1817 at 2012-08-31 15:17:59
可以的啊,只是比较麻烦,重叠PCR先获得两倍DNA,其中有一倍DNA,需要电泳回收,然后获得四倍DNA,同样,其中有两倍DNA,电泳回收后,再做一次重叠pCR,就可以得到5倍的DNA了!另外,我想请教您一个问题,呵呵,我最 ...

同样序列的重叠PCR你是否做过,我担心的是第一轮PCR的时候就不能扩增出两倍的DNA,而只有单倍的DNA,或则你有关于重叠引物设计的不同技巧。
关于CO差光谱,方法如下:
(1) 向纯化后的蛋白液中加入过量的连二亚硫酸钠(约20mg),使样品处于还原态。
(2) 将上述样品一式两份:一份通CO 3min;另一份作为对照,静置于暗室中使其充分络合。
(3) 用分光光度计对样品进扫描,获取CO差光谱。
4楼2012-09-03 09:20:37
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rock5719633

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得设计一对融合酶切位点,一次一个加上去,应该可以的。’

楼主的问题最后解决了么?
5楼2012-12-12 01:47:27
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