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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问如何将序列重复拷贝数倍增后连接
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liouwzh

木虫 (正式写手)

[求助] 请问如何将序列重复拷贝数倍增后连接

现有一序列，约350bp左右，想使此片段重复5次后连接成1750bp长度左右的片段，连接时不要出现酶切位点等接头，有没有什么好的方法？如果用重叠PCR是否可行。
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1楼 2012-06-12 08:43:19
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liouwzh

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuhedong1817 at 2012-08-31 15:17:59
可以的啊，只是比较麻烦，重叠PCR先获得两倍DNA，其中有一倍DNA，需要电泳回收，然后获得四倍DNA，同样，其中有两倍DNA，电泳回收后，再做一次重叠pCR，就可以得到5倍的DNA了！另外，我想请教您一个问题，呵呵，我最 ...

同样序列的重叠PCR你是否做过，我担心的是第一轮PCR的时候就不能扩增出两倍的DNA，而只有单倍的DNA，或则你有关于重叠引物设计的不同技巧。
关于CO差光谱，方法如下：
(1) 向纯化后的蛋白液中加入过量的连二亚硫酸钠（约20mg），使样品处于还原态。
(2) 将上述样品一式两份：一份通CO 3min；另一份作为对照，静置于暗室中使其充分络合。
(3) 用分光光度计对样品进扫描，获取CO差光谱。
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4楼2012-09-03 09:20:37
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liuhedong1817

木虫 (正式写手)

hello

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励用作 2012-09-03 13:42:52
小丹木木: 不好意思，操作失误，是鼓励应助 2012-09-03 13:43:28
可以的啊，只是比较麻烦，重叠PCR先获得两倍DNA，其中有一倍DNA，需要电泳回收，然后获得四倍DNA，同样，其中有两倍DNA，电泳回收后，再做一次重叠pCR，就可以得到5倍的DNA了！另外，我想请教您一个问题，呵呵，我最近要做CO差光谱法分析血红蛋白，我想知道你们是怎么用一氧化碳处理细胞破碎液上清的，将一氧化碳通入液体中的时候，要做什么防护吗？谢谢你了
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老婆的头像
3楼2012-08-31 15:17:59
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rock5719633

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得设计一对融合酶切位点，一次一个加上去，应该可以的。’

楼主的问题最后解决了么？
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5楼2012-12-12 01:47:27
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