应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切，切不下来
202/2返回列表上一页12
查看: 2925  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-11 13:56:03
本帖内容被屏蔽
11楼2012-06-11 08:02:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蜗牛061610

木虫 (小有名气)

1

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-11 13:56:14
个人认为酶切验证比较靠谱，我用一个质粒连接1kb的产物，空质粒照样能批出1kb条带，所以有时候pcr验证不很靠谱。估计楼主是没有连接上，长出的克隆或许是因为双切不充分，造成单切自连的（两个酶切位点挨的太紧的话，双酶切不好切，你大致看看两个切点的距离）。
最好还是你双切能验证出片段。
赞一下 回复此楼
1
12楼2012-06-11 09:27:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以重提下质粒试试！！我以前就遇到过这种情况，重提了一次就切开了
赞一下 回复此楼
13楼2012-06-11 10:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hubohuna

新虫 (初入文坛)
衷心感谢各位同仁，我打算先送测序，没结果的话就重新定引物了，再次感谢各位！
赞一下 回复此楼
14楼2012-06-11 10:46:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

geneyhh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-06-13 13:40:33
你做菌液PCR时用的什么引物？两个引物最好都是载体上的引物，然后根据PCR片段大小进行判断，不要选择insert DNA上的引物，当然一个是insert DNA 上的引物，一个是vector上的引物也是没问题的。insert DNA和vector连上以后酶切位点可能会消失，所以切不下来，及时是sticky end也可能会消失哦。送出去测序可以比较快的得出结论。
赞一下 回复此楼
15楼2012-06-11 16:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

apollo/ty

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励下 2012-06-13 13:40:48
要有一定的纯度才能保证你PCR出来的是你的片段，而且跑胶后就要确认你的质粒大小是否为你片段和载体连接后的大小，鉴定最好用酶切法，PCR不是很准
赞一下 回复此楼
16楼2012-06-12 22:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小娇amazing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

估计是 连接上之后酶切位点发生了变化，所以才会切不下来 你分别单切试试，看能不能切开，看重组质粒片段的大小
赞一下 回复此楼
17楼2012-06-13 15:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果你确定连上了，换换酶试试？有可能酶失活。另外，用试剂盒提质粒，最后不要用TE把质粒洗下来，用水。
赞一下 回复此楼
18楼2012-06-13 16:20:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

colaes

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by lihao1988903 at 2012-06-13 16:20:17
如果你确定连上了，换换酶试试？有可能酶失活。另外，用试剂盒提质粒，最后不要用TE把质粒洗下来，用水。

为什么 用水洗更好呢？求指导
赞一下 回复此楼
19楼2013-03-06 16:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我好暴躁啊

新虫 (小有名气)
我也是这种情况呀
赞一下 回复此楼
20楼2017-05-31 09:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hubohuna 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭