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hubohuna

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切,切不下来

小弟第一次够载体,片段大小大约一千三,酶切位点为hind111&noc1(没有设置保护碱基),之前切t载体,切载体,切片段都是成功的,然后将目的片段和载体连接导入大肠杆菌后,涂板子,挑菌落,做菌落pcr,显示有带,做质粒pcr验证显示也有目的带(可不可以说,片段是连到质粒上去了的?)但是酶切没结果,单酶切和双酶切条带基本一样。这个问题困扰我近半个月了,反反复复做了好几次都一样。
ps.质粒是用安比奥的试剂盒提的。
求大神帮忙指点,感激不尽!

[ Last edited by 1949stone on 2012-6-9 at 13:02 ]
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colaes

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by lihao1988903 at 2012-06-13 16:20:17
如果你确定连上了,换换酶试试?有可能酶失活。另外,用试剂盒提质粒,最后不要用TE把质粒洗下来,用水。

为什么 用水洗更好呢?求指导
19楼2013-03-06 16:37:56
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查看全部 20 个回答

hubohuna

新虫 (初入文坛)

质粒大概5kbp的样子
2楼2012-06-08 18:44:58
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swky

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

3楼2012-06-08 18:51:59
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-06-08 21:50:58
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-06-08 21:51:06
有没有作对照,提取质粒做酶切双切如果得不到目的片段,你可以试试单酶切,看一下大小的。你选的酶,酶切位点在目的片段中有没有,是不是唯一的。
4楼2012-06-08 19:32:24
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