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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切，切不下来
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hubohuna

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切，切不下来

小弟第一次够载体，片段大小大约一千三，酶切位点为hind111&noc1（没有设置保护碱基），之前切t载体，切载体，切片段都是成功的，然后将目的片段和载体连接导入大肠杆菌后，涂板子，挑菌落，做菌落pcr，显示有带，做质粒pcr验证显示也有目的带（可不可以说，片段是连到质粒上去了的？）但是酶切没结果，单酶切和双酶切条带基本一样。这个问题困扰我近半个月了，反反复复做了好几次都一样。
ps.质粒是用安比奥的试剂盒提的。
求大神帮忙指点，感激不尽！

[ Last edited by 1949stone on 2012-6-9 at 13:02 ]
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1楼 2012-06-08 18:41:10
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apollo/ty

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励下 2012-06-13 13:40:48
要有一定的纯度才能保证你PCR出来的是你的片段，而且跑胶后就要确认你的质粒大小是否为你片段和载体连接后的大小，鉴定最好用酶切法，PCR不是很准
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16楼2012-06-12 22:27:31
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hubohuna

新虫 (初入文坛)
质粒大概5kbp的样子
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2楼2012-06-08 18:44:58
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swky

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2012-06-08 18:51:59
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-06-08 21:50:58
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-06-08 21:51:06
有没有作对照，提取质粒做酶切双切如果得不到目的片段，你可以试试单酶切，看一下大小的。你选的酶，酶切位点在目的片段中有没有，是不是唯一的。
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4楼2012-06-08 19:32:24
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