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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活
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songtuo1987

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活

请问各位大仙，有谁知道如何用DNS法测α-淀粉酶酶活吗？小弟最近正愁这事呢，有人知道的话，教小弟具体步骤吧，急
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1楼2012-06-07 16:19:05
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protein_

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab: 金币+6, 谢谢热心交流~ 2012-06-10 18:13:23
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-06-09 04:35:08
我对这个方法有看法：
1、如果淀粉酶不能承受70度保温15分钟，就会失活，我不是空口无凭的，在这个条件下我的很多酶都会失活。
2、没有提到缓冲系统，不能在酶的降解反应中保持恒定pH值。
3、氢氧化钠没有和DNS ...

顾问说的很有道理，可能由于每个人针对做的样品不同可能有些误差，就有些我略懂的东西简单解释下
1. α-淀粉酶是能经受住70度温度，此处利用70度15分钟目的是为了使β-淀粉酶失活，因为有可能β淀粉酶水解淀粉释放出的还原糖对结果造成影响（样品中含β-淀粉酶）。
2.在提取酶液的时候用缓冲液提取的，所以没提到。
3.DNS在配置过程中添加了氢氧化钠，终止反应时有时利用TCA或者氢氧化钠，DNS我理解成显色反应
4.绝干是针对自己的试验，不解释了。
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6楼2012-06-10 15:32:59
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)
★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 23:06:34
DNS法其实是测定还原糖含量的一种常用的方法，而淀粉酶可以水解淀粉成为还原糖（葡萄糖），所以你只需取一定量的淀粉，加一定量的淀粉酶，控制好酶作用的条件，然后灭酶活，接着采用DNS法测定其中的还原糖含量，从而推算出酶活大小
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分享信息，提高自己
2楼2012-06-07 17:25:57
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microblue

银虫 (小有名气)
生化实验书上就有吧
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3楼2012-06-07 19:43:28
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protein_

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 谢谢热心交流~ 2012-06-10 18:13:13
取1mL酶液于试管中，70℃保温15min，迅速冷却后，在40℃下预热15min，然后加入2mL40℃预热好的1%可溶性淀粉，摇匀后40℃下反应5min，迅速冷却并加入4mL0.4M氢氧化钠终止反应，然后取1mL反应液于试管中，加入1mLDNS，沸水浴5min，迅速冷却，定容至15mL，520nm下测定OD值。
参比：将酶液用氢氧化钠灭活，然后加入淀粉，其他步骤相同。
空白：利用1mL蒸馏水代替1mL反应液，其他步骤相同。
酶活力单位定义：上述条件下底物在1min催化生产1μmol还原糖的酶量定义为一个酶活力单位U（绝干）。
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4楼2012-06-08 10:17:16
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