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雪湛蓝铁杆木虫 (正式写手)
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[求助]
手提基因组方法遇到的问题
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自今年三月份开学以来，我用酚氯仿法手提一个细菌的基因组，在提的过程中，首先加入溶菌酶，带菌体溶解后加入了10%的SDS，然后加入等体积氯仿和等体积的苯酚，离心后发现溶液分层，上下层透明，中间为白色蛋白质，然而，当我吸取上层液体时发现，上层不是水状液体，而是果冻状透明体，之后无论怎么吸都无可避免的会将白色蛋白质吸上去，以至于后期处理无法进行，得不到想要的基因组。 但是上学期，我用此方法提取该菌的基因组时，相当顺利，也没有果冻状液体出现。有时认为是周围环境温度的问题，但是在冰上做也是得不到理想结果。所以在此求助大家，希望能得到解决办法，或者大家能提供一个细菌基因组提取的方法。 |
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雪湛蓝
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有几点 1. SDS浓度是不是太高了？10%是母液浓度还是终浓度？一般终浓度1%就可以了。 2. SDS低温下溶解度会下降的，所以建议控温在20度左右裂解，而不是在冰上。 3. 有时候我在提取基因组的时候也会发现低温离心后会在界面出现一些白色膜状物，有时候不一定是蛋白质，也可能是水相中低温析出的溶解的酚，在加入乙醇或异丙醇后会溶解（蛋白不会溶解），不影响后续纯化。 4. DNA样品浓度大时本身就是粘度很大的，不用担心，接着做就是了 |
3楼2012-06-06 21:26:57
雪湛蓝
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