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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急求！提DNA时,超声破碎后还用加蛋白酶K吗?
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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)

[交流] 急求！提DNA时,超声破碎后还用加蛋白酶K吗?

提DNA时,超声破碎后还用加蛋白酶K吗?
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1楼 2012-06-04 17:21:31
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heroyl

木虫 (正式写手)
★ ★
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西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 18:41:37
应该要的吧，不知道你提的什么DNA，提之后做什么，我曾经看到过超声后用蛋白酶K消化的。
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2楼2012-06-04 21:20:27
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-06 18:41:29
zhejiahuo1: 金币+1, 谢谢 2012-06-17 07:01:23
具体的提取步骤不清楚，但是个人感觉应该还需要吧。超声只是破碎细胞，而蛋白酶的一个重要作用是破坏蛋白结构致其沉淀除去。当然，如果提取过程有加入SDS的操作，蛋白酶的这个作用就可以不用考虑了。
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3楼2012-06-04 22:50:20
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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)
我是加入裂解液(含SDS)后超声破碎，提了DNA后想做巢式PCR
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4楼2012-06-05 05:33:01
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
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西瓜: 金币+2, Good！ 2012-06-06 18:41:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2012-06-04 22:50:20
具体的提取步骤不清楚，但是个人感觉应该还需要吧。超声只是破碎细胞，而蛋白酶的一个重要作用是破坏蛋白结构致其沉淀除去。当然，如果提取过程有加入SDS的操作，蛋白酶的这个作用就可以不用考虑了。

蛋白酶最好还是加，能保证更充分的裂解。
超声是破碎细胞。应该属于物理性破碎？
蛋白酶属于酶消化破碎，使DNA充分释放。
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5楼2012-06-05 08:27:24
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足下客

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也认为加入蛋白酶K之后DNA的提取效果会好很多。我每次提DNA时都会加入一定比例的蛋白酶K。
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6楼2012-06-05 09:10:17
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zhejiahuo1

铁虫 (小有名气)
谢谢各位！！！
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7楼2012-06-06 15:53:06
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馋猫

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
都超声了，还需要处理吗
DNA都碎掉了，不明白提DNA为什么要超声
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8楼2012-06-07 17:24:00
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371522029

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
8楼: Originally posted by 馋猫 at 2012-06-07 17:24:00
都超声了，还需要处理吗
DNA都碎掉了，不明白提DNA为什么要超声

我也觉得最好不要超声破碎，超声确实会打碎基因条带。植物的可以试试。细菌和动物组织一般用蛋白酶，SDS，溶菌酶就可以达到要求。物理法一般有反复冻溶，低温碾磨等。不建议用超声波和微波。
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9楼2012-06-08 11:34:28
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371522029

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhejiahuo1: 金币+2, 谢谢 2012-06-17 07:00:33
引用回帖:
8楼: Originally posted by 馋猫 at 2012-06-07 17:24:00
都超声了，还需要处理吗
DNA都碎掉了，不明白提DNA为什么要超声

我也觉得最好不要超声破碎，超声确实会打碎基因条带。植物的可以试试。细菌和动物组织一般用蛋白酶，SDS，溶菌酶就可以达到要求。物理法一般有反复冻溶，低温碾磨等。不建议用超声波和微波。
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10楼2012-06-08 12:07:02
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371522029

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 馋猫 at 2012-06-07 17:24:00
都超声了，还需要处理吗
DNA都碎掉了，不明白提DNA为什么要超声

我也觉得最好不要超声破碎，超声确实会打碎基因条带。植物的可以试试。细菌和动物组织一般用蛋白酶，SDS，溶菌酶就可以达到要求。物理法一般有反复冻溶，低温碾磨等。不建议用超声波和微波。
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11楼2012-06-08 12:08:06
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wangjiaojiao

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 馋猫 at 2012-06-07 17:24:00
都超声了，还需要处理吗
DNA都碎掉了，不明白提DNA为什么要超声

如果只做PCR的话是不怕超声破碎的~碎掉的也能P出来~
诸如酵母之类细胞壁比较厚的，往往SDS裂解的效果极不理想，酶破壁也要孵育比较长的时间~
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12楼2012-06-08 13:05:05
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加了蛋白酶K效果会更加好
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13楼2012-09-12 16:14:12
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