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shwkx1987

新虫 (小有名气)


[交流] 就要被免疫荧光折磨疯了,大侠啊,求救啊!!!

从上学期开始做间接免疫荧光,染得是细胞角蛋白骨架。刚开始荧光太弱,摸索了好一阵子,这学期初终于能染好了。可从四月中开始,固定这一步出现了致命的问题,至今找不到好的解决办法。不知有没有有经验的同学可以指点一下啊
  我之前一直用的是-20度遇冷的100%甲醇在-20度固定十分钟,效果还好。可现在固定五分钟细胞就都收缩甚至直接就脱片了,实在不知道为何啊。用4%甲醛、多聚甲醛固定细胞都不会收缩,但严重影响抗体的结合,荧光极弱。
    现在是实验的关键阶段,出现这样的问题,就如晴天霹雳,这段时间快痛苦死了。求救啊!!!!
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yushenye

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
“用4%甲醛、多聚甲醛固定细胞都不会收缩,但严重影响抗体的结合,荧光极弱。”
应该是你没有透化好吧
8楼2012-05-30 16:28:29
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肖颖2009

铁虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是细胞状态不好啊,先把细胞状态调整好再说吧~
2楼2012-05-30 11:12:07
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shwkx1987

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 肖颖2009 at 2012-05-30 11:12:07
是不是细胞状态不好啊,先把细胞状态调整好再说吧~

我也想到了,复苏了新的还是一样
4楼2012-05-30 12:13:53
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废哥117

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你试一下用4%多聚甲醛固定然后再用甲醇固定
5楼2012-05-30 13:32:13
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