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shengnan1987

铁虫 (初入文坛)

[求助] 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题

我做的是一种蛋白酶的原核表达,c端带一个his标签,大小31kd,等电点10,pet24a可溶表达,但表达量不高,不到50%,用镍柱纯化,Binding: 20 mM sodium phosphate, 20 mM Imidazole,500 mM  NaCl, PH 8.0
Elution: 20 mM sodium phosphate, 500 mM Imidazole,
500 mM  NaCl, PH8.0
调整咪唑的浓度,要么峰型好,但杂带还是很多;要么没有特异的峰出现。请问各位高手有没有好的纯化方法?非常感谢
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走自己的路
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shengnan1987

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-05-28 10:20:57
走过梯度没?没有的话可以走个咪唑的洗脱梯度试试。

15楼2012-06-27 23:04:00
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孙启亮

金虫 (著名写手)

西瓜: 金币-40, 2楼赞助楼主散金 2012-05-27 18:43:25
西瓜: 金币-40, 2楼赞助楼主散金 2012-05-27 18:43:36
西瓜: 金币-20, 2楼赞助楼主散金。共100金币。 2012-05-27 18:44:08
西瓜: 金币+50, 返回之前赞助金币 2012-06-04 14:35:09
西瓜: 金币+50, 返回之前赞助金币 2012-06-04 14:35:18
我回帖赞助你金币,1个BB太少了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-05-27 18:39:39
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shengnan1987

铁虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-27 18:39:39
我回帖赞助你金币,1个BB太少了

谢谢!没经验
走自己的路
3楼2012-05-27 22:44:51
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anzaigtt

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果是“表达量”不高,那是培养体系的问题。和纯化关系不大。
4楼2012-05-28 07:56:14
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