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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怪事天天有，PET32a 表达蛋白出现多条带，求解
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qqm8445

金虫 (正式写手)

[求助] 怪事天天有，PET32a 表达蛋白出现多条带，求解

我用PET32a 表达一个分子量约为44KD的蛋白，这是我跑的包含体的SDS——PAGE：
从左到右：marker,1-3洗的包含体；4，5纯化的带，我的分子量是44KD左右。
marker从上往下96，66，44，29，20，14.
我的目的带应该是2——3间的那条；

现在不明白，第4条那2条浓的带是什么带呢？你们的有不？
还有大于96KD的又是什么带？二聚体？三聚体？

因为不太熟悉，所以还没有做WB

从左到右，marker,1-3洗的包含体；4，5纯化的带，我的分子量是44KD左右。marker从上往下96，66，44，29，20，14.
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1楼2012-05-22 23:20:59
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哦 2012-05-23 14:00:56
qqm8445: 金币+25, ★★★很有帮助, 我的表达量很低，跑菌就看不出目的带，只有洗了包含体后，才能知道是否有我的蛋白 2012-05-27 14:11:36
你首先需要做的是确定能不能诱导出你的蛋白
之后才是纯化的过程
蛋白实验首先第一步是构建载体，确定无误了，之后进行诱导表达，确定该菌株能够诱导出蛋白来，如果都在包涵体内，需要优化诱导条件，从你图片里看不到诱导或未诱导的条带，建议先做简单的诱导未诱导对照试验
可以先做一管未诱导，之后分别诱导1~4小时，分别取样，之后取菌体离心，这样能够确定一个最好的诱导时间和诱导量，最好再去纯化。

希望这样讲能给你一些帮助
如果还不明白的话，你可以联系我给我留言，彼此交流一下。
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3楼2012-05-23 08:55:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 辛苦了哦 2012-05-23 14:00:38
qqm8445: 金币+25, ★★★很有帮助, 是BL21（DE3）晚些时间我再上些图，到时麻烦你帮我分析下，谢谢了 2012-05-27 14:10:22
首先不知道的你用的哪个宿主菌？第二你这没有未诱导的或者空宿主作为对照，不好说明问题。
如果用的是BL21(DE3)作为宿主，宿主本身确实是有几条很浓的条带。建议跑个未诱导的或者空宿主看看。
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2楼2012-05-23 06:43:43
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