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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求解：Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)

[求助] 求解：Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？

Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？
PS：已排除污染状况。
探针序列为：VIC-TAG CCG CCT TCG CCA-MGB
附图：图中所有曲线均为空白对照组。


[ Last edited by 蓝叶子0558 on 2012-5-22 at 10:36 ]
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1楼2012-05-22 09:46:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

snowyizhou

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 蓝叶子0558 at 2012-05-24 15:33:26:
在不加模板的情况下也会形成？

引物自身环化造成的，和模板无关，建议1：将设计引物和探针的报告图片截取传上来，分析研究；2：相对来说，探针-探针本身不一定有，大部分这样种情况都属于 探针-引物所形成的二聚体，4楼的说法很专业啊(http://wenku.baidu.com/view/cefc2d573c1ec5da50e270f2.html 附网址 探针设计注意事项)；3：同时，还要防止探针的解链温度高于引物，会影响引物效率，应将探针3'端完全磷酸化；4：模板污染问题。
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8楼2012-05-24 15:51:18
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)
顶起，求大神！！！
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2楼2012-05-22 17:04:14
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yuyixst

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
蓝叶子0558: 金币+1 2012-05-24 14:43:52
如果排除了污染，那可能是引物探针二聚体或者错配吧
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3楼2012-05-22 19:51:39
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuyixst at 2012-05-22 19:51:39:
如果排除了污染，那可能是引物探针二聚体或者错配吧

错配的话MGB探针应该不会发出荧光信号吧。
采用另一条探针、相同引物进行PCR，结果正常，所以引物应该是没问题的。什么情况下容易形成探针二聚体呢？
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4楼2012-05-24 14:39:46
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yuyixst

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 蓝叶子0558 at 2012-05-24 14:39:46:
错配的话MGB探针应该不会发出荧光信号吧。
采用另一条探针、相同引物进行PCR，结果正常，所以引物应该是没问题的。什么情况下容易形成探针二聚体呢？

我想可能的话会是上游引物的3‘端和探针的5’端相连，或许会有信号，我有一对引物探针是这样的
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5楼2012-05-24 15:02:06
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuyixst at 2012-05-24 15:02:06:
我想可能的话会是上游引物的3‘端和探针的5’端相连，或许会有信号，我有一对引物探针是这样的

在不加模板的情况下也会形成？
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6楼2012-05-24 15:33:26
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuyixst at 2012-05-24 15:02:06:
我想可能的话会是上游引物的3‘端和探针的5’端相连，或许会有信号，我有一对引物探针是这样的

另补充一点情况，望大神帮我分析分析。
用阳性样品做完RT-PCR后进行电泳，发现完全没有条带出来，就是说PCR过程中并没有扩增。
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7楼2012-05-24 15:39:44
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yuyixst

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
蓝叶子0558: 金币+5 2012-05-24 17:01:32
引用回帖:
7楼: Originally posted by 蓝叶子0558 at 2012-05-24 15:39:44:
另补充一点情况，望大神帮我分析分析。
用阳性样品做完RT-PCR后进行电泳，发现完全没有条带出来，就是说PCR过程中并没有扩增。

阳性样品无条带（可以排除产物污染），加上你说的NTC有扩增曲线，可能还是你的引物和探针的二聚体，根本没有和目的模板结合，电泳肯定就没有条带，NTC的扩增曲线有可能是二聚体形成的！
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9楼2012-05-24 16:07:00
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by snowyizhou at 2012-05-24 15:51:18:
引物自身环化造成的，和模板无关，建议1：将设计引物和探针的报告图片截取传上来，分析研究；2：相对来说，探针-探针本身不一定有，大部分这样种情况都属于 探针-引物所形成的二聚体，4楼的说法很专业啊(http://we

献上糯米糍一个。
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10楼2012-05-24 17:00:07
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