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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)

[求助] 求解:Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事?

Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事?
PS:已排除污染状况。
探针序列为:VIC-TAG CCG CCT TCG CCA-MGB
附图:图中所有曲线均为空白对照组。


[ Last edited by 蓝叶子0558 on 2012-5-22 at 10:36 ]
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snowyizhou

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 蓝叶子0558 at 2012-05-24 15:33:26:
在不加模板的情况下也会形成?

引物自身环化造成的,和模板无关,建议1:将设计引物和探针的报告图片截取传上来,分析研究;2:相对来说,探针-探针本身不一定有,大部分这样种情况都属于 探针-引物所形成的二聚体,4楼的说法很专业啊(http://wenku.baidu.com/view/cefc2d573c1ec5da50e270f2.html 附网址 探针设计注意事项);3:同时,还要防止探针的解链温度高于引物,会影响引物效率,应将探针3'端完全磷酸化;4:模板污染问题。
8楼2012-05-24 15:51:18
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)

顶起,求大神!!!
2楼2012-05-22 17:04:14
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yuyixst

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
蓝叶子0558: 金币+1 2012-05-24 14:43:52
如果排除了污染,那可能是引物探针二聚体或者错配吧
3楼2012-05-22 19:51:39
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yuyixst at 2012-05-22 19:51:39:
如果排除了污染,那可能是引物探针二聚体或者错配吧

错配的话MGB探针应该不会发出荧光信号吧。
采用另一条探针、相同引物进行PCR,结果正常,所以引物应该是没问题的。什么情况下容易形成探针二聚体呢?
4楼2012-05-24 14:39:46
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