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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)

[求助] 求解：Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？

Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？
PS：已排除污染状况。
探针序列为：VIC-TAG CCG CCT TCG CCA-MGB
附图：图中所有曲线均为空白对照组。


[ Last edited by 蓝叶子0558 on 2012-5-22 at 10:36 ]
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1楼 2012-05-22 09:46:05
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yuyixst

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
蓝叶子0558: 金币+5 2012-05-24 17:01:32
引用回帖:
7楼: Originally posted by 蓝叶子0558 at 2012-05-24 15:39:44:
另补充一点情况，望大神帮我分析分析。
用阳性样品做完RT-PCR后进行电泳，发现完全没有条带出来，就是说PCR过程中并没有扩增。

阳性样品无条带（可以排除产物污染），加上你说的NTC有扩增曲线，可能还是你的引物和探针的二聚体，根本没有和目的模板结合，电泳肯定就没有条带，NTC的扩增曲线有可能是二聚体形成的！
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9楼2012-05-24 16:07:00
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)
顶起，求大神！！！
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2楼2012-05-22 17:04:14
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yuyixst

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
蓝叶子0558: 金币+1 2012-05-24 14:43:52
如果排除了污染，那可能是引物探针二聚体或者错配吧
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3楼2012-05-22 19:51:39
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蓝叶子0558

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuyixst at 2012-05-22 19:51:39:
如果排除了污染，那可能是引物探针二聚体或者错配吧

错配的话MGB探针应该不会发出荧光信号吧。
采用另一条探针、相同引物进行PCR，结果正常，所以引物应该是没问题的。什么情况下容易形成探针二聚体呢？
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4楼2012-05-24 14:39:46
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