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中国药人金虫 (小有名气)
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关于兼并引物扩增
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各位大侠： 我最近在利用简并引物做PCR扩增，设计了两对简并引物（都是根据保守区域设计的），一对上下游都是简并引物（兼并度都为64）。另一对上游是兼并引物、下游是dT,利用Touchdown进行扩增，条件为95摄氏度预变性4min,95℃变性30sec，55℃开始每个循环减低0.5℃1min，72℃1min 20x，95℃变性30sec，45℃1min，72℃1min 10x,但是扩增出来的都是弥散的片段没有很明显的条带。接下来我该如何提高反应的特异性？是不是利用简并引物和dT都不容易做出来啊？求解？急！ |
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