24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2092  |  回复: 13

wrp814

铜虫 (小有名气)

[求助] 要做cDNA文库,但是cDNA合成的结果有问题,是哪出问题了呢?

最近要做cDNA文库,但是cDNA合成的结果有问题,不知道是哪出问题了?
下面是cDNA合成之后,LD-PCR之后的电泳结果。一大片的抹带,还有上面和下面的也不知道是什么东西。

11
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anhongxue

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的点样孔怎么有杂质呢?是不是你提取的RNA就有问题啊!我也做cDNA文库构建,以后可以多交流。
2楼2012-05-21 13:22:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrp814

铜虫 (小有名气)

你的点样孔怎么有杂质呢?是不是你提取的RNA就有问题啊!我也做cDNA文库构建,以后可以多交流。
3楼2012-05-21 14:36:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrp814

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by anhongxue at 2012-05-21 13:22:02:
你的点样孔怎么有杂质呢?是不是你提取的RNA就有问题啊!我也做cDNA文库构建,以后可以多交流。

对呀,杂质是什么呢。不知道原因啊,而且最下面好像也有杂质。你提完的RNA做DNase I试验吗?还是直接用于cDNA合成。
4楼2012-05-21 19:33:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kuaile-RJ

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-22 08:32:09
从你的电泳图片来看,初步分析是跑胶的问题,你的Marker貌似也有抹带啊,还有你的点样孔都存在污染,楼主可以重新跑胶试试。光看cDNA的话,貌似还可以吧,亮度可以,而且是呈现弥散拖尾状态。不知道楼主提完RNA跑胶没有,一般RNA质量好的话,逆转录成cDNA应该不成问题。个人见解,希望对楼主有所帮助!
5楼2012-05-21 23:52:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skuy1223

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议楼主考虑一下所用RNA的纯度和完整性
努力!
6楼2012-05-22 08:46:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anhongxue

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by wrp814 at 2012-05-21 19:33:50:
对呀,杂质是什么呢。不知道原因啊,而且最下面好像也有杂质。你提完的RNA做DNase I试验吗?还是直接用于cDNA合成。

我提完的RNA都用DNase I纯化的,要不然后又DNA的污染。你提完RNA没跑点用吗?没有DNA污染吗?
7楼2012-05-22 14:21:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrp814

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by anhongxue at 2012-05-22 14:21:16:
我提完的RNA都用DNase I纯化的,要不然后又DNA的污染。你提完RNA没跑点用吗?没有DNA污染吗?

材料的问题,我RNA含量就非常低,才20几ng。我直接用RNA跑PCR没有带,我就没用DNase I纯化。也不知道行是不行。
8楼2012-05-22 23:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrp814

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kuaile-RJ at 2012-05-21 23:52:46:
从你的电泳图片来看,初步分析是跑胶的问题,你的Marker貌似也有抹带啊,还有你的点样孔都存在污染,楼主可以重新跑胶试试。光看cDNA的话,貌似还可以吧,亮度可以,而且是呈现弥散拖尾状态。不知道楼主提完RNA跑胶

跑胶了,质量还行。就是260/230在1点3左右   有点低。但是都说每什么影响我就用了。不知道有没有问题?
9楼2012-05-22 23:39:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anhongxue

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by wrp814 at 2012-05-22 23:36:13:
材料的问题,我RNA含量就非常低,才20几ng。我直接用RNA跑PCR没有带,我就没用DNase I纯化。也不知道行是不行。

含量低不是问题,重要的是纯度,要没有污染。
10楼2012-05-23 13:55:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wrp814 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利|求调剂 +9 Micky11223 2026-03-25 9/450 2026-03-30 22:18 by 我是小康
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +11 Youth_ 2026-03-30 11/550 2026-03-30 21:01 by peike
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +12 辰沐5211314 2026-03-26 12/600 2026-03-30 19:28 by Wang200018
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +16 李李不服输 2026-03-26 16/800 2026-03-30 17:47 by wangjy2002
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
[考研] 南京大学化学调剂 +10 景随风 2026-03-29 15/750 2026-03-30 11:21 by limeifeng
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +8 柳溪边 2026-03-26 8/400 2026-03-29 20:42 by 唐沐儿
[考研] 305求调剂 +8 RuiFairyrui 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:22 by fmesaito
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 085600,材料与化工321分,求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 各位老师您好:本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
信息提示
请填处理意见