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微露晨曦

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助western mark 转膜不全,急!

我用的湿转,蛋白分子量分别是220,54,36,电泳时挺好,mark都出来了,转膜的时候发现大分子量的mark没出来,我转膜的条件是300mA,电压最大。请各位给分析一下什么原因啊
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微露晨曦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-20 21:20:24:
嗯....................
       不知道为什么总觉得你这几个蛋白放一起转有点勉强 我以前也是听别人说湿转法很好(自己一直用半干法) 能将Marker整个都上去 但我自己用MBI的Marker从来都没有这个效果 要不就是小 ...

我前面都转出来了,但是这几次都没出来,一样的条件啊,我的Buffer里没有加SDS,甲醇含量20%
4楼2012-05-20 22:15:06
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微露晨曦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 蛋蛋宝贝 at 2012-05-20 21:29:55:
分子量大的蛋白使用浓度低的胶,转膜时间延长

我用的是10%的分离胶,4%的浓缩胶。还没试过把时间延长,因为前面做的都转出来了
5楼2012-05-20 22:18:39
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