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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定
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fanxiaojuan

金虫 (小有名气)

[交流] 黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定

我用的方法如下：
    木素过氧化物酶（LiP）测定：取 0.2mL 藜芦醇溶液（10mmol•L-1）、0.4mL 酒石酸缓冲液（250mmol•L-1，pH=3.0）与 0.4mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 310nm 处 2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化藜芦醇产生 1μmol藜芦醛所需的酶量。
    锰过氧化物酶（MnP）测定：将 0.2113g MnSO4溶解于 1L 酒石酸缓冲液（50mmol•L-1，pH=4.5）中，取 0.8mL 该溶液同 0.2mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 290nm 处2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化 Mn2+产生 1μmol Mn3+所需的酶量。
    漆酶采用ABTS法
但测出吸光度是负值，请大家帮忙分析一下并提出宝贵意见，还有不解的是怎么把吸光度的变化转化为酶活，还有就是测定2min钟前后的吸光度变化，这两分钟怎么选取，随便选取两分钟即可吗，或者大家有没有测这几种酶的具体方法，能否分享一下，拜托各位了！

[ Last edited by fanxiaojuan on 2012-5-17 at 17:05 ]
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1楼 2012-05-17 17:02:11
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1509118638

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请求那位高人能否告诉我测定锰过氧化物酶和木素过氧化物酶的计算公式，吸光值怎样转换成酶活？先受小妹一拜，不胜感激!邮箱：shhuang@soil.gd.cn
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45楼2012-08-11 17:09:08
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
得金币了，说声谢谢！
赞一下 回复此楼
13楼2012-05-17 19:05:12
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啄虫鸟

新虫 (著名写手)
★
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
闲来逛逛……
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14楼2012-05-17 19:09:05
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liushuyan6楼
2012-05-17 18:49   回复  
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
86739294910楼
2012-05-17 18:54   回复  
引用回帖:
4楼: Originally posted by sesame_oil at 2012-05-17 18:39:31:

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