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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 有关Nano drop的一些问题
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wlyanddmj

铜虫 (正式写手)

[交流] 有关Nano drop的一些问题 已有6人参与

单链DNA 4度离心沉淀后，为了测试上清液中有多少核酸损失，我用Nano drop测上清液的浓度，（溶剂是75%乙醇，所以用75%乙醇做的空白）结果很诡异，其中一个样品A280居然为负数，还有一个260/280为127.31，这是怎么回事呀，上清里面到底有木有核酸，量是多少呀……
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1楼 2012-05-14 20:05:01
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dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-15 15:22:55
A280应该是蛋白多肽的吸收峰，负值很正常，但是负的很多就不正常了。不知道你的是什么情况。
260/280是RNA的指标，127.31，是很大的数值啊，我们一般觉得到2.0以上就很多了，你这只要仪器没问题，那上清肯定都是RNA。
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2楼2012-05-15 09:09:21
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longrna

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有醇能测OD吗？即使空白....
建议咨询NanoDrop
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伟大航线....
3楼2012-05-15 09:09:27
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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1949stone: , 这么快？？ 2012-05-19 15:16:38
75%乙醇做的空白，测的时候早挥发干净了。
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4楼2012-05-16 11:20:11
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wlyanddmj

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiao7270 at 2012-05-16 11:20:11:
75%乙醇做的空白，测的时候早挥发干净了。

啊！才两秒中的时间诶
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5楼2012-05-16 11:27:51
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xmuring

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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1949stone: 金币+2, 鼓励 2012-05-19 15:17:07
我们提质粒纯化质粒的时候都要先把乙醇挥发干净再加溶剂溶解DNA，感觉乙醇的存在会干扰DNA浓度测定。。。你可以尝试下用超纯水做空白，扫一下乙醇的谱图，看一下它的吸收情况，排除溶剂的影响再想其他的办法
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6楼2012-05-18 20:15:06
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wlyanddmj

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xmuring at 2012-05-18 20:15:06:
我们提质粒纯化质粒的时候都要先把乙醇挥发干净再加溶剂溶解DNA，感觉乙醇的存在会干扰DNA浓度测定。。。你可以尝试下用超纯水做空白，扫一下乙醇的谱图，看一下它的吸收情况，排除溶剂的影响再想其他的办法

好的，谢了！
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7楼2012-05-19 13:59:30
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猫猫不会玩

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-05-15 09:09:21
A280应该是蛋白多肽的吸收峰，负值很正常，但是负的很多就不正常了。不知道你的是什么情况。
260/280是RNA的指标，127.31，是很大的数值啊，我们一般觉得到2.0以上就很多了，你这只要仪器没问题，那上清肯定都是RN ...

请问，nano drop 测蛋白准吗？和紫外分光光度计比哪个准确些呢？吸收峰值在哪个范围比较准确？0.1-1.5？A260/280的值有要求吗？谢谢O(∩_∩)O~
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8楼2013-11-26 19:19:40
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 猫猫不会玩 at 2013-11-26 19:19:40
请问，nano drop 测蛋白准吗？和紫外分光光度计比哪个准确些呢？吸收峰值在哪个范围比较准确？0.1-1.5？A260/280的值有要求吗？谢谢O(∩_∩)O~...

嗯，只能说可信，我们做单子的时候就是以nanodrop数据给他们的。蛋白吸收峰在280，核酸在260，一般蛋白很少看A260/280的值，除非是核酸特别多。一般质粒小提，A260/280的值要控制在1.8-2.0，大了就是核酸多了，少了就是蛋白含量多了。
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9楼2013-11-26 20:46:55
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swallow3002

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不能用酒精做Blank的，亲。
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10楼2014-09-04 00:22:47
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