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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于管家基因Ct值
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yangye198764

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于管家基因Ct值

刚开始做QRT-PCR，发现所有样品管家基因的Ct值相差很大，差不多从18到26，这样的结果可以用吗？如果不能用，这可能是由于什么原因造成的呢？
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1楼 2012-05-13 20:50:40
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-14 13:41:10
如果你是做相对定量，那是可以的，因为最终比的是各个样品与actin的比值，如果你说的是同一样品actin的ct值有这么大的变化，那可用性就不高了
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yangye198764
我努力我奋斗我成功
2楼2012-05-14 09:41:56
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yangye198764

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-05-14 09:41:56:
如果你是做相对定量，那是可以的，因为最终比的是各个样品与actin的比值，如果你说的是同一样品actin的ct值有这么大的变化，那可用性就不高了

我做的是相对定量，还想请问下这可能是什么原因造成的呢？是不是有可能是我的RNA提的有问题，质量不好什么的，请高手指教。
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3楼2012-05-14 19:54:17
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yiyi12

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能模板量也不一样吧!
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yangye198764
4楼2012-05-14 23:12:54
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yangye198764

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yiyi12 at 2012-05-14 23:12:54:
可能模板量也不一样吧!

模板量加的应该没有问题，我跑的几个不同的引物，用同一批模板，得出来的管家基因Ct值都差不多
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5楼2012-05-15 08:26:26
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

可能是你的RNA里混有DNA所致。可以用DNA酶处理RNA后再反转录。
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6楼2012-12-25 08:05:16
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stewart3261

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你在逆转录时加的RNA的量不一样吧？尽量调节一下，大致在某个数字范围。这样扩增时的CT相差不会太大！
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7楼2012-12-25 09:12:59
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307314

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-12-25 09:12:59
你在逆转录时加的RNA的量不一样吧？尽量调节一下，大致在某个数字范围。这样扩增时的CT相差不会太大！

“相差不大 ”，多大才算大？多少个循环数差别内？ 我抽提的几个样，分别跑的内参ct 是23 25 26  这样的数算差别的吗？
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8楼2013-08-25 15:04:43
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