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yangye198764

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于管家基因Ct值

刚开始做QRT-PCR,发现所有样品管家基因的Ct值相差很大,差不多从18到26,这样的结果可以用吗?如果不能用,这可能是由于什么原因造成的呢?
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cheng_xiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-14 13:41:10
如果你是做相对定量,那是可以的,因为最终比的是各个样品与actin的比值,如果你说的是同一样品actin的ct值有这么大的变化,那可用性就不高了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

我努力我奋斗我成功
2楼2012-05-14 09:41:56
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yangye198764

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cheng_xiao at 2012-05-14 09:41:56:
如果你是做相对定量,那是可以的,因为最终比的是各个样品与actin的比值,如果你说的是同一样品actin的ct值有这么大的变化,那可用性就不高了

我做的是相对定量,还想请问下这可能是什么原因造成的呢?是不是有可能是我的RNA提的有问题,质量不好什么的,请高手指教。
3楼2012-05-14 19:54:17
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yiyi12

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能模板量也不一样吧!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-05-14 23:12:54
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yangye198764

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yiyi12 at 2012-05-14 23:12:54:
可能模板量也不一样吧!

模板量加的应该没有问题,我跑的几个不同的引物,用同一批模板,得出来的管家基因Ct值都差不多
5楼2012-05-15 08:26:26
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

可能是你的RNA里混有DNA所致。可以用DNA酶处理RNA后再反转录。
6楼2012-12-25 08:05:16
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stewart3261

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你在逆转录时加的RNA的量不一样吧?尽量调节一下,大致在某个数字范围。这样扩增时的CT相差不会太大!
7楼2012-12-25 09:12:59
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307314

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by stewart3261 at 2012-12-25 09:12:59
你在逆转录时加的RNA的量不一样吧?尽量调节一下,大致在某个数字范围。这样扩增时的CT相差不会太大!

“相差不大 ”,多大才算大?多少个循环数差别内? 我抽提的几个样,分别跑的内参ct 是23 25 26  这样的数算差别的吗?
8楼2013-08-25 15:04:43
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