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jocelyn2012

新虫 (初入文坛)

[交流] 令人纠结的PCR,求高手指点 已有8人参与

今天PCR,目标条带1500bp左右,模板是cDNA,68度延伸1min40s,结果出来了2000-3000bp(据marker)的条带,这如何是好?
注:cDNA P其他基因没有问题
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fly12365

铜虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
估计是引物有问题,现在我也遇到了相同的问题,扩增1000bp的激发子片段,结果跑出2000多的片段,检查Tm,降低一下试试,跑个梯度确定一下温度。
9楼2012-05-11 23:08:44
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恶魔眼球

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主给出的信息还不够详细啦~目标片段不对,有可能是引物设计不对。最好能上图,这样大家才能更好地帮你解决问题。Good luck~
2楼2012-05-09 15:58:19
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可帅儿

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问你引物的TM值是多少?
追随自己的心!不要做让自己后悔的事!
3楼2012-05-09 16:41:41
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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
注意调节退火温度,与引物的Tm值有关的
4楼2012-05-09 16:54:18
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