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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 令人纠结的PCR,求高手指点
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jocelyn2012

新虫 (初入文坛)

[交流] 令人纠结的PCR,求高手指点已有8人参与

今天PCR,目标条带1500bp左右，模板是cDNA，68度延伸1min40s，结果出来了2000-3000bp（据marker）的条带，这如何是好？
注：cDNA P其他基因没有问题
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1楼2012-05-09 15:00:23
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恶魔眼球

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主给出的信息还不够详细啦~目标片段不对，有可能是引物设计不对。最好能上图，这样大家才能更好地帮你解决问题。Good luck~
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2楼2012-05-09 15:58:19
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可帅儿

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你引物的TM值是多少？
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追随自己的心！不要做让自己后悔的事！
3楼2012-05-09 16:41:41
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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
注意调节退火温度，与引物的Tm值有关的
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4楼2012-05-09 16:54:18
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rny

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主的延伸温度好高啊，我们一般都不用这么高的
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5楼2012-05-10 08:57:45
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hyacinth326

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by rny at 2012-05-10 08:57:45:
楼主的延伸温度好高啊，我们一般都不用这么高的

这延伸温度还高啊，一般延伸不都72度么
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6楼2012-05-10 09:06:54
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rny

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不好意思，搞错了，你的退火温度多少啊？用的什么酶？
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7楼2012-05-10 09:08:39
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rny

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我看大家P的目的片段长得时候才用68度延伸，你的也不是很长啊
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8楼2012-05-10 09:16:12
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fly12365

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
估计是引物有问题，现在我也遇到了相同的问题，扩增1000bp的激发子片段，结果跑出2000多的片段，检查Tm，降低一下试试，跑个梯度确定一下温度。
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9楼2012-05-11 23:08:44
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
核对下引物，会不会是引物出了问题呢！
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10楼2012-05-12 09:36:37
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