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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 高手指点一下蜗牛酶的除菌
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qizongxian

金虫 (小有名气)

[求助] 高手指点一下蜗牛酶的除菌

各位高手，小弟请教一个问题啊，我们实验室买的蜗牛酶是粉末状的，配成试剂形式之后需要过滤除菌，可是用0.45μm的滤膜过滤不了，拿去4℃离心，发现其有沉淀，这是怎么回事，各位是怎么除菌的？
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1楼 2012-05-04 09:13:57
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547star

木虫 (著名写手)
我用紫外灯照射30min,然后简单微滤。
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为什么
6楼2012-05-04 23:35:40
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查看全部 7 个回答

wjf008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以试一试孔径稍微大一点的膜，如果还是不行只能是考虑酶变性了。离心不是一种除菌的常用手段吧，不可能离心效果那么好的。
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2楼2012-05-04 10:09:09
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab: 回帖置顶 2012-05-04 11:32:38
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 谢谢热心交流~ :) 2012-05-04 11:32:55
qizongxian: 金币+5, ★★★很有帮助, 解答很给力！！十分感谢！~ 2012-05-04 11:51:34
粉末状的可能是有两种制备方法，一种是将酶纯化之后冻干，但涉及到酶的重组表达和分离纯化，工序较多，投入成本高，价格偏贵，而且纯酶一般是液态产品，没有必要制备成冻干粉。另一种是粗酶冻干，这样的工序少，制备成本低，但粗酶可能含有一些杂质，在冻干之前的离心过膜步骤去除不了，但冻干之后再溶解就沉淀下来了。或者粗酶在冻干之前还加了一些吸附剂来吸附，那么冻干之后再溶解产生的沉淀更多。

最直接的方法是测定溶解之后的酶活力比商品包装上写的损失了多少，但我觉得没必要，损失就损失了，测了之后也不会重新变多。而且如果是用来破壁制备原生质体的蜗牛酶没必要很纯，粗一点没关系。

有沉淀就先离心再过膜，直接过0.45微米的膜肯定堵的。

我认为有沉淀是正常的，也是可以接受的，最多也就下次买纯酶，只要有钱。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-05-04 10:55:32
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qizongxian

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wjf008 at 2012-05-04 10:09:09:
可以试一试孔径稍微大一点的膜，如果还是不行只能是考虑酶变性了。离心不是一种除菌的常用手段吧，不可能离心效果那么好的。

但是我看到别人的论文里面都用的是0.45微米的滤膜过滤，我确重复不出来，同时还有一点就是蜗牛酶用了同一品牌不同批次的，同样都是离心12000rpm离心，都得沉淀，取上清液离心的话还是有一定的酶活力！~所以不懂是怎么回事啊！~
能够请问一下你用的是什么牌子的蜗牛酶吗?怎么除菌的？？
谢谢了！~
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4楼2012-05-04 11:49:22
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