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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒小提的试剂盒一个柱子最多能提多少ml的菌液啊
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明辨是非

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒小提的试剂盒一个柱子最多能提多少ml的菌液啊

我们实验室比较穷一些做转染嫌去内毒素的大提试剂盒太贵了只能用平时的质粒小提试剂盒代替 之前的师哥用此法做转染虽然转染率低但是也成功了
实验室为了节省柱子师哥师姐们都是反复使用的 不知道用没有同样做法的虫友 想请教下要是提100ml的菌液（DH5α）最少用几个吸附柱啊 或者说一个吸附柱最多能处理多少ml的菌液 我们的试剂盒是biomiga的pd1211－01 按说明书上来是一个柱子1～4ml的菌液
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1楼 2012-05-02 21:19:09
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vir2008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-03 13:52:23
明辨是非: 金币+5, ★★★很有帮助, 好的 我试了下 菌液多的 跑出来更亮 2012-05-05 16:46:46
一般就是不超过4ml。我为了尽可能得到更多的质粒，也常用4ml，但从没敢更多。

个人感觉：小提试剂盒往往很难满足要求。如果转染率不高，逼得后面做G418筛选之类的事，那就得不偿失了。用不起Qiagen，天根也行啊。
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2楼2012-05-02 23:23:24
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-03 13:52:32
每个柱子有它本身最大的结合质粒能力（可从厂家处获得）。如30ug。
理论上讲，如果1ml菌里有1ug质粒，则可以用30ml的菌制的上清过一个柱子（裂解液那些要按比例增加即你不能用裂解4ml的体系来裂解30ml菌）。但柱子的另外的一个问题是会产生堵塞：杂质太多或太粘稠容易堵，视上清情况而定。
故，究竟可以使用多少的菌液仍需要你自己的摸索。而不同的菌或不同的质粒肯定也不一样。
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伟大航线....
3楼2012-05-03 08:59:43
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个与菌液没有关系吧，与质粒DNA的量有关，每个柱子都有一定的承载量
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4楼2012-05-03 09:19:59
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
柱子都重复使用？不怕污染啊。
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Thank-you，so-blue.
5楼2012-05-03 11:12:04
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明辨是非

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-03 11:12:04:
柱子都重复使用？不怕污染啊。

是说的在一次提质粒的过程中反复用 是提的同一瓶菌液
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6楼2012-05-05 16:42:58
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明辨是非

银虫 (小有名气)
西瓜: 回帖置顶 2012-05-06 11:09:11
引用回帖:
5楼: Originally posted by susizheng at 2012-05-03 11:12:04:
柱子都重复使用？不怕污染啊。

是说的在一次提质粒的过程中反复用 是提的同一瓶菌液
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7楼2012-05-05 16:43:35
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明辨是非

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by longrna at 2012-05-03 08:59:43:
每个柱子有它本身最大的结合质粒能力（可从厂家处获得）。如30ug。
理论上讲，如果1ml菌里有1ug质粒，则可以用30ml的菌制的上清过一个柱子（裂解液那些要按比例增加即你不能用裂解4ml的体系来裂解30ml菌）。但柱 ...

很感谢你 堵塞的问题我倒是没想过 我试了下 感觉上溶液的量要多加
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8楼2012-05-05 16:48:38
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chaovt714

金虫 (小有名气)
看你菌液浓度~~~我们一般菌体量少的话，一个EP管里加两次菌液离心。。。
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9楼2012-05-05 20:34:13
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
只要不是太山寨的试剂盒，说明书上都会对菌液的用量有说明，你可以仔细找找看。我们用的生工的SanPre质粒提取试剂盒，其建议菌液使用量为1.5mL~5mL，供你参考下哈。
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10楼2012-05-06 11:15:15
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