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M13噬菌体DNA提取
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求助： 1、70%乙醇洗涤，体积多少比较合适？真空干燥，没有真空干燥设备，有没有什么方法可以代替？ 2、离心转速是14000rpm还是10000rpm？ 3、如果送公司测序，一般浓度多大比较好？ [ Last edited by zzl20070 on 2012-5-2 at 18:51 ] |
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4楼2012-05-03 17:28:59
yuluoqiutong
木虫 (正式写手)
初出茅庐
- 应助: 14 (小学生)
- 金币: 2279.9
- 散金: 116
- 红花: 1
- 帖子: 319
- 在线: 70.9小时
- 虫号: 1737786
- 注册: 2012-04-05
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2012-05-03 09:48:41
3楼2012-05-03 10:36:16
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I 挑单克隆，摇床4.5h，200r，离心30sec后，将上清500μl 含噬 菌体上清转入一新鲜离心管。 II 加 200μl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置 10min。 III 14000rpm 4°c离心 10min，弃上清液。 IV 短暂离心，小心吸去残余上清。 V 沉淀物彻底重悬于 100μl 碘化物缓冲液中，加入 250μl 乙醇。室温温育10min。短时间的室温温育使单链噬菌体 DNA 沉淀而大多数噬菌体蛋白保持在溶液中。 VI 14000rpm 4°c离心 10min，弃上清。用 70%的乙醇洗沉淀，离心12000rpm 5min 吸净干燥（这个离心数和二楼的不一样，你可以都试试） VII 沉淀重悬于 30μl 双蒸水中贮存。 |
5楼2012-05-03 17:34:13
40