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zzl20070

金虫 (小有名气)

[求助] M13噬菌体DNA提取

求助:
1、70%乙醇洗涤,体积多少比较合适?真空干燥,没有真空干燥设备,有没有什么方法可以代替?
2、离心转速是14000rpm还是10000rpm?
3、如果送公司测序,一般浓度多大比较好?

[ Last edited by zzl20070 on 2012-5-2 at 18:51 ]
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zzl20070

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yuluoqiutong at 2012-05-03 09:48:41:
你好,我们用的是75%的乙醇,是按两倍体积加的,然后13000rpm 5min就足够了。不需要真空干燥,打开盖子室温就可以了。具体测序的溶度要根据公司要求,具体可以看公司测序的订单背面,都有具体的标注

你们送过吗?哪个公司比较好?
4楼2012-05-03 17:28:59
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你好,我们用的是75%的乙醇,是按两倍体积加的,然后13000rpm 5min就足够了。不需要真空干燥,打开盖子室温就可以了。具体测序的溶度要根据公司要求,具体可以看公司测序的订单背面,都有具体的标注
2楼2012-05-03 09:48:41
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haosmile

金虫 (正式写手)

LZ,你好!我也正在准备提取M13的DNA,请问lz的提取步骤是什么呀?能否分享一下?谢谢了呀!
3楼2012-05-03 10:36:16
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zzl20070

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by haosmile at 2012-05-03 10:36:16:
LZ,你好!我也正在准备提取M13的DNA,请问lz的提取步骤是什么呀?能否分享一下?谢谢了呀!

I 挑单克隆,摇床4.5h,200r,离心30sec后,将上清500μl 含噬
菌体上清转入一新鲜离心管。

II 加 200μl PEG/NaCl,颠倒混匀,室温放置 10min。
III 14000rpm 4°c离心 10min,弃上清液。
IV 短暂离心,小心吸去残余上清。
V 沉淀物彻底重悬于 100μl 碘化物缓冲液中,加入 250μl 乙醇。室温温育10min。短时间的室温温育使单链噬菌体 DNA 沉淀而大多数噬菌体蛋白保持在溶液中。
VI 14000rpm 4°c离心 10min,弃上清。用 70%的乙醇洗沉淀,离心12000rpm 5min 吸净干燥(这个离心数和二楼的不一样,你可以都试试)
VII 沉淀重悬于 30μl 双蒸水中贮存。
5楼2012-05-03 17:34:13
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