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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » M13噬菌体DNA提取
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zzl20070

金虫 (小有名气)

[求助] M13噬菌体DNA提取

求助：
1、70%乙醇洗涤，体积多少比较合适？真空干燥，没有真空干燥设备，有没有什么方法可以代替？
2、离心转速是14000rpm还是10000rpm？
3、如果送公司测序，一般浓度多大比较好？

[ Last edited by zzl20070 on 2012-5-2 at 18:51 ]
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1楼 2012-05-02 18:47:29
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，我们用的是75%的乙醇，是按两倍体积加的，然后13000rpm 5min就足够了。不需要真空干燥，打开盖子室温就可以了。具体测序的溶度要根据公司要求，具体可以看公司测序的订单背面，都有具体的标注
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2楼2012-05-03 09:48:41
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haosmile

金虫 (正式写手)
LZ,你好！我也正在准备提取M13的DNA，请问lz的提取步骤是什么呀？能否分享一下？谢谢了呀！
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3楼2012-05-03 10:36:16
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zzl20070

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuluoqiutong at 2012-05-03 09:48:41:
你好，我们用的是75%的乙醇，是按两倍体积加的，然后13000rpm 5min就足够了。不需要真空干燥，打开盖子室温就可以了。具体测序的溶度要根据公司要求，具体可以看公司测序的订单背面，都有具体的标注

你们送过吗？哪个公司比较好？
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4楼2012-05-03 17:28:59
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zzl20070

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by haosmile at 2012-05-03 10:36:16:
LZ,你好！我也正在准备提取M13的DNA，请问lz的提取步骤是什么呀？能否分享一下？谢谢了呀！

I 挑单克隆，摇床4.5h，200r，离心30sec后，将上清500μl 含噬
菌体上清转入一新鲜离心管。

II 加 200μl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置 10min。
III 14000rpm 4°c离心 10min，弃上清液。
IV 短暂离心，小心吸去残余上清。
V 沉淀物彻底重悬于 100μl 碘化物缓冲液中，加入 250μl 乙醇。室温温育10min。短时间的室温温育使单链噬菌体 DNA 沉淀而大多数噬菌体蛋白保持在溶液中。
VI 14000rpm 4°c离心 10min，弃上清。用 70%的乙醇洗沉淀，离心12000rpm 5min 吸净干燥（这个离心数和二楼的不一样，你可以都试试）
VII 沉淀重悬于 30μl 双蒸水中贮存。
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5楼2012-05-03 17:34:13
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yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
zzl20070: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-05-04 21:04:48
引用回帖:
4楼: Originally posted by zzl20070 at 2012-05-03 17:28:59:
你们送过吗？哪个公司比较好？

质粒、PCR产物、或基因组的都可以测序，我们现在是送华大基因的，以前送过英韦创津的，结果还行，就是涨价了。华大也还可以
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6楼2012-05-04 09:11:15
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stan01

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
m13噬菌体单链dna提取也有试剂盒的，和提质粒一样
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7楼2012-05-04 14:36:03
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了了5123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zzl20070 at 2012-05-03 17:34:13
I 挑单克隆，摇床4.5h，200r，离心30sec后，将上清500μl 含噬
菌体上清转入一新鲜离心管。

II 加 200μl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置 10min。
III 14000rpm 4°c离心 10min，弃上清液。
IV 短暂离心，小心 ...

楼主，你好，我现在也在提取DNA，不知道楼主当时提取DNA的浓度怎么样，我现在提的浓度很小而且跑得电泳前方有小片段，可否交流一下
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8楼2015-06-12 10:22:05
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baby1_9253344

金虫 (小有名气)
借贴咨询一下，碘化物缓冲液是怎么配的啊？NEB里只写了缓冲溶液的配方，没说加的是NaI还是KI，以及I的浓度
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9楼2015-07-17 11:09:05
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