应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » M13噬菌体DNA提取
91/1返回列表
查看: 1839  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zzl20070

金虫 (小有名气)

[求助] M13噬菌体DNA提取

求助：
1、70%乙醇洗涤，体积多少比较合适？真空干燥，没有真空干燥设备，有没有什么方法可以代替？
2、离心转速是14000rpm还是10000rpm？
3、如果送公司测序，一般浓度多大比较好？

[ Last edited by zzl20070 on 2012-5-2 at 18:51 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-02 18:47:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，我们用的是75%的乙醇，是按两倍体积加的，然后13000rpm 5min就足够了。不需要真空干燥，打开盖子室温就可以了。具体测序的溶度要根据公司要求，具体可以看公司测序的订单背面，都有具体的标注
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-05-03 09:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haosmile

金虫 (正式写手)
LZ,你好！我也正在准备提取M13的DNA，请问lz的提取步骤是什么呀？能否分享一下？谢谢了呀！
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-03 10:36:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzl20070

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuluoqiutong at 2012-05-03 09:48:41:
你好，我们用的是75%的乙醇，是按两倍体积加的，然后13000rpm 5min就足够了。不需要真空干燥，打开盖子室温就可以了。具体测序的溶度要根据公司要求，具体可以看公司测序的订单背面，都有具体的标注

你们送过吗？哪个公司比较好？
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-03 17:28:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzl20070

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by haosmile at 2012-05-03 10:36:16:
LZ,你好！我也正在准备提取M13的DNA，请问lz的提取步骤是什么呀？能否分享一下？谢谢了呀！

I 挑单克隆，摇床4.5h，200r，离心30sec后，将上清500μl 含噬
菌体上清转入一新鲜离心管。

II 加 200μl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置 10min。
III 14000rpm 4°c离心 10min，弃上清液。
IV 短暂离心，小心吸去残余上清。
V 沉淀物彻底重悬于 100μl 碘化物缓冲液中，加入 250μl 乙醇。室温温育10min。短时间的室温温育使单链噬菌体 DNA 沉淀而大多数噬菌体蛋白保持在溶液中。
VI 14000rpm 4°c离心 10min，弃上清。用 70%的乙醇洗沉淀，离心12000rpm 5min 吸净干燥（这个离心数和二楼的不一样，你可以都试试）
VII 沉淀重悬于 30μl 双蒸水中贮存。
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-03 17:34:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuluoqiutong

木虫 (正式写手)

初出茅庐

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
zzl20070: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-05-04 21:04:48
引用回帖:
4楼: Originally posted by zzl20070 at 2012-05-03 17:28:59:
你们送过吗？哪个公司比较好？

质粒、PCR产物、或基因组的都可以测序，我们现在是送华大基因的，以前送过英韦创津的，结果还行，就是涨价了。华大也还可以
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-05-04 09:11:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stan01

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
m13噬菌体单链dna提取也有试剂盒的，和提质粒一样
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-04 14:36:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

了了5123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zzl20070 at 2012-05-03 17:34:13
I 挑单克隆，摇床4.5h，200r，离心30sec后，将上清500μl 含噬
菌体上清转入一新鲜离心管。

II 加 200μl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置 10min。
III 14000rpm 4°c离心 10min，弃上清液。
IV 短暂离心，小心 ...

楼主，你好，我现在也在提取DNA，不知道楼主当时提取DNA的浓度怎么样，我现在提的浓度很小而且跑得电泳前方有小片段，可否交流一下
赞一下 回复此楼
8楼2015-06-12 10:22:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
借贴咨询一下，碘化物缓冲液是怎么配的啊？NEB里只写了缓冲溶液的配方，没说加的是NaI还是KI，以及I的浓度
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-17 11:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zzl20070 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学 +32 妮妮ninicgb 2026-04-04 37/1850 2026-04-10 22:18 by bljnqdcc
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +4 弱水听文 2026-04-09 4/200 2026-04-10 22:01 by doctff
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 346，工科0854求调剂，专硕 +5 moser233 2026-04-10 6/300 2026-04-10 18:04 by 周邵阳
[考研] 本9 一志愿西工大085601 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-10 16:57 by luoyongfeng
[考研] 337求调剂 +3 研s. 2026-04-10 3/150 2026-04-10 16:20 by 木子君1218
[考博] 博士自荐 +7 可可小胖 2026-04-08 7/350 2026-04-10 08:28 by kimhero
[考研] 085400 328分 求调剂 +8 喂你一个大橙子 2026-04-09 12/600 2026-04-09 19:20 by zl8213662
[考研] 材料299专硕求调剂 +10 +21 2026-04-09 10/500 2026-04-09 17:34 by 1753564080
[考研] 085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +18 梁富贵险中求 2026-04-04 20/1000 2026-04-09 11:18 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 一志愿南京航空航天大学 材料与化工329分求调剂 +11 Mr. Z 2026-04-05 12/600 2026-04-08 16:15 by luoyongfeng
[考研] 生物医药调剂｜SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 081700，311，求调剂 +17 冬十三 2026-04-04 18/900 2026-04-07 12:50 by Sammy2
[考研] 一志愿华中农业大学0710（A）初试329分 求调剂 +5 一名26考研生 2026-04-04 5/250 2026-04-07 08:54 by 18828373951
[考研] 081200-11408-367学硕求调剂 +4 1_2_3111 2026-04-06 4/200 2026-04-07 08:13 by jp9609
[考研] 求调剂 +7 张.1 2026-04-05 7/350 2026-04-05 20:40 by 啵啵啵0119
[考研] 083200 333求调剂 +3 十二！！ 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:28 by barlinike
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭