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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 请教大家关于拟南芥保卫细胞原生质体分离
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lxz2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教大家关于拟南芥保卫细胞原生质体分离 已有1人参与

本人新手，最近在做拟南芥保卫细胞原生质体的分离，但是保卫细胞还在叶片的骨架上，没有释放出来。用的纤维素酶和果胶酶都是国产的，是不是没得活性要比进口的低很多，我们一些同学都是用的sigma的？在配制酶溶液时，很多酶都没有溶解，用的时候瞬时离心一下，发现有很多沉淀，说明很多的酶都没有溶解，这样酶溶液的浓度肯定不够了，那么是不是很影响实验的效果？请教大家，谢谢！
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1楼 2012-05-02 18:34:11
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zhiwuyazhe

金虫 (小有名气)
楼主您好，请问您最后拟南芥保卫细胞原生质体分离是不是很成功了？
您应该是用两步酶解法吧，您的步骤包括每一种介质的渗透势等可以借鉴一下嘛？
谢谢
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5楼2013-10-23 10:38:25
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
纤维素酶和果胶酶,鬼子的最好，保卫细胞原生质体很好做，你可以先用榨汁机把表皮条破碎了，具体方法可以见J SHEEN的实验室的。纤维素酶和果胶酶是需要加热的溶的。
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2楼2012-05-04 11:33:37
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lxz2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiemin217 at 2012-05-04 11:33:37:
纤维素酶和果胶酶,鬼子的最好，保卫细胞原生质体很好做，你可以先用榨汁机把表皮条破碎了，具体方法可以见J SHEEN的实验室的。纤维素酶和果胶酶是需要加热的溶的。

谢谢你！现在做的好了一些，就是最后得到的原生质体里面不是很纯，还有一些小的碎片，怎么除去呢，我用的是30微米尼龙网。还有得到的保卫细胞原生质体要提RNA的话，用Trizol好些，还是其他的方法好些?非常感谢你！
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3楼2012-05-11 09:56:12
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ljxxf

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有小碎片就多洗涤几次，，
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4楼2012-07-26 09:37:31
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