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lxz2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教大家关于拟南芥保卫细胞原生质体分离 已有1人参与

本人新手,最近在做拟南芥保卫细胞原生质体的分离,但是保卫细胞还在叶片的骨架上,没有释放出来。用的纤维素酶和果胶酶都是国产的,是不是没得活性要比进口的低很多,我们一些同学都是用的sigma的?在配制酶溶液时,很多酶都没有溶解,用的时候瞬时离心一下,发现有很多沉淀,说明很多的酶都没有溶解,这样酶溶液的浓度肯定不够了,那么是不是很影响实验的效果?请教大家,谢谢!
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xiemin217

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
纤维素酶和果胶酶,鬼子的最好,保卫细胞原生质体很好做,你可以先用榨汁机把表皮条破碎了,具体方法可以见J SHEEN的实验室的。纤维素酶和果胶酶是需要加热的溶的。
2楼2012-05-04 11:33:37
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lxz2012

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xiemin217 at 2012-05-04 11:33:37:
纤维素酶和果胶酶,鬼子的最好,保卫细胞原生质体很好做,你可以先用榨汁机把表皮条破碎了,具体方法可以见J SHEEN的实验室的。纤维素酶和果胶酶是需要加热的溶的。

谢谢你!现在做的好了一些,就是最后得到的原生质体里面不是很纯,还有一些小的碎片,怎么除去呢,我用的是30微米尼龙网。还有得到的保卫细胞原生质体要提RNA的话,用Trizol好些,还是其他的方法好些?非常感谢你!
3楼2012-05-11 09:56:12
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ljxxf

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有小碎片就多洗涤几次,,
4楼2012-07-26 09:37:31
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zhiwuyazhe

金虫 (小有名气)

楼主您好,请问您最后拟南芥保卫细胞原生质体分离是不是很成功了?
您应该是用两步酶解法吧,您的步骤包括每一种介质的渗透势等可以借鉴一下嘛?
谢谢
5楼2013-10-23 10:38:25
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落叶的轨迹

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhiwuyazhe at 2013-10-23 10:38:25
楼主您好,请问您最后拟南芥保卫细胞原生质体分离是不是很成功了?
您应该是用两步酶解法吧,您的步骤包括每一种介质的渗透势等可以借鉴一下嘛?
谢谢

你好,请问你有分离出GCPs么?最近在做,问题很多,想请教,时间过了这么久也不知能不能联系到你
6楼2015-09-17 10:29:14
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