应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 透析 蛋白沉淀 复性
51/1返回列表
查看: 3177  |  回复: 22
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jamy1989

木虫 (小有名气)

[求助] 透析 蛋白沉淀 复性

我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析复性，透析完后全部沉淀了，跑胶什么都没有！我透析的步骤是：
1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl   0.4M L-Arg    1mM EDTA   0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8
2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl   0.4M L-Arg    1mM EDTA   0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8
3、binding buffer 20mM磷酸钠 500mM氯化钠 5mM咪唑 PH=7.6
虫友分析可能是透析蛋白浓度大，梯度变化太大了！于是我重新做了两个对比试验。这次透析的蛋白溶度被我降低了！并且每升只透析20ml，我做了个对比试验：
1号瓶分别用4M 尿素、 1M尿素、binding buffer 透析！
2号瓶分别用4M 尿素、 2M尿素、1M尿素、0M尿素、binding buffer 透析！
结果1号瓶还是在用binding buffer透析是全部出现沉淀，取沉淀跑胶，能看到目的条带！
2号瓶也是在用binding buffer 透析是全部出现沉淀（大约在透析3个小时的时候就有很多沉淀了），和1号瓶一样！另外当2号瓶透析到0M结束时我取了一些样保留下来，跑胶能看到目的条带！
我在想是不是binding buffer 有问题呢？我底下准备用His-tag纯化蛋白，是不是一定要用binding buffer 透析呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
qwdr
1楼2012-04-30 22:17:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danbomingyue

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-05-09 09:18:29
jamy1989: 金币+5 2012-05-10 10:52:37
本帖内容被屏蔽
3楼2012-05-08 10:44:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

jamy1989

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by danbomingyue at 2012-05-08 10:44:26:
我想问一下，你能否采用稀释复性后上柱？一定要用透析方法吗？我知道有得项目一般是变性以后直接稀释N倍，过夜低温复性，然后上柱分离层析，不知道你的产品是否可以这样做？

貌似不可以吧，我的是要除去尿素复性的！
赞一下 回复此楼
qwdr
4楼2012-05-08 21:03:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danbomingyue

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2012-05-09 12:14:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
jamy1989: 金币+5 2012-05-09 16:17:14
这么看是binding buffer 的可能性比较大啊。你可以透析到0M urea的时候就不透析了，改为desalting换buffer试试。
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-09 12:50:28
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭