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构建质粒时 质粒上的ATG与目的基因ATG 的问题
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不知道各位在构建质粒时，遇到这种情况： Nco I 位点处含有ATG密码子时，使用的酶切位点为 B、C两处，目的基因正向引物序列ACTCGAATCCATGGCAAGTTCG。 在氨基酸序列翻译时，是从A处的ATG开始，而B处的ATG阅读框发生改变？  |
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 【分子生物】EPI帖 |
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susizheng
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5楼2012-04-27 21:02:10
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2楼2012-04-26 20:20:45
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【答案】应助回帖
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有这么几个问题， 1，EcoRI 酶切位点是GAATTC,不是GAATCC，估计是手误。记得不要犯这种错误哦，不然引物合成出来，载体构建不成功都还知道是什么原因。 2，翻译是从载体上ATG开始的，即是你标记的A处，所以你的引物设计应该在酶切位点后面加一个G，即GAATTC-G，这样才能保证你的基因不移码。 3，既然翻译从载体上的ATG开始的，所以酶切位点后面可以不用再加你基因的ATG了。 4，EcoRI 酶切位点的保护碱基是CCG，当然也有人说可以随便加碱基，但个人认为竟然有保护碱基表，还是按照标准来。 所以引物应该是：CCG-GAATTC-G-GCAAGTTCG（后面再补几个碱基吧，至少18个碱基配对啊，才9个，太抠了吧） |
3楼2012-04-26 20:27:19
4楼2012-04-27 13:43:19
