应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建质粒时 质粒上的ATG与目的基因ATG 的问题
51/1返回列表
查看: 4595  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

Diacetyl

铁虫 (初入文坛)

[求助] 构建质粒时 质粒上的ATG与目的基因ATG 的问题

不知道各位在构建质粒时，遇到这种情况：
Nco I 位点处含有ATG密码子时，使用的酶切位点为 B、C两处，目的基因正向引物序列ACTCGAATCCATGGCAAGTTCG。
在氨基酸序列翻译时，是从A处的ATG开始，而B处的ATG阅读框发生改变？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-26 14:31:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 专家考核, 辛苦 2012-04-26 22:05:56
从A框也就是NcoI中的ATG开始翻译。
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-26 20:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！ 2012-04-26 22:06:12
Diacetyl: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-27 13:43:56
有这么几个问题，
1，EcoRI 酶切位点是GAATTC,不是GAATCC，估计是手误。记得不要犯这种错误哦，不然引物合成出来，载体构建不成功都还知道是什么原因。
2，翻译是从载体上ATG开始的，即是你标记的A处，所以你的引物设计应该在酶切位点后面加一个G，即GAATTC-G，这样才能保证你的基因不移码。
3，既然翻译从载体上的ATG开始的，所以酶切位点后面可以不用再加你基因的ATG了。
4，EcoRI 酶切位点的保护碱基是CCG，当然也有人说可以随便加碱基，但个人认为竟然有保护碱基表，还是按照标准来。
所以引物应该是：CCG-GAATTC-G-GCAAGTTCG（后面再补几个碱基吧，至少18个碱基配对啊，才9个，太抠了吧）
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
3楼2012-04-26 20:27:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Diacetyl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-04-26 20:27:19:
有这么几个问题，
1，EcoRI 酶切位点是GAATTC,不是GAATCC，估计是手误。记得不要犯这种错误哦，不然引物合成出来，载体构建不成功都还知道是什么原因。
2，翻译是从载体上ATG开始的，即是你标记的A处，所以你的 ...

非常感谢给予的指正，现在明白怎样处理这样的问题了。
您第三点提到的 ATG是不是 可加可不加？
谢谢！
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-27 13:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
4楼: Originally posted by Diacetyl at 2012-04-27 13:43:19:
非常感谢给予的指正，现在明白怎样处理这样的问题了。
您第三点提到的 ATG是不是 可加可不加？
谢谢！

是的，可加可不加。
回复此楼
Thank-you，so-blue.
5楼2012-04-27 21:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Diacetyl 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工求调剂 +5 绪幸与子 2026-03-17 5/250 2026-03-17 16:40 by laoshidan
[考研] 277调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 4/200 2026-03-17 16:36 by 无际的草原
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 293求调剂 +5 世界首富 2026-03-11 5/250 2026-03-17 10:16 by Sammy2
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +5 Liwangman 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:10 by 我的船我的海
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭