应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建质粒时 质粒上的ATG与目的基因ATG 的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 4618  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Diacetyl

铁虫 (初入文坛)

[求助] 构建质粒时 质粒上的ATG与目的基因ATG 的问题

不知道各位在构建质粒时，遇到这种情况：
Nco I 位点处含有ATG密码子时，使用的酶切位点为 B、C两处，目的基因正向引物序列ACTCGAATCCATGGCAAGTTCG。
在氨基酸序列翻译时，是从A处的ATG开始，而B处的ATG阅读框发生改变？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-26 14:31:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good！ 2012-04-26 22:06:12
Diacetyl: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-27 13:43:56
有这么几个问题，
1，EcoRI 酶切位点是GAATTC,不是GAATCC，估计是手误。记得不要犯这种错误哦，不然引物合成出来，载体构建不成功都还知道是什么原因。
2，翻译是从载体上ATG开始的，即是你标记的A处，所以你的引物设计应该在酶切位点后面加一个G，即GAATTC-G，这样才能保证你的基因不移码。
3，既然翻译从载体上的ATG开始的，所以酶切位点后面可以不用再加你基因的ATG了。
4，EcoRI 酶切位点的保护碱基是CCG，当然也有人说可以随便加碱基，但个人认为竟然有保护碱基表，还是按照标准来。
所以引物应该是：CCG-GAATTC-G-GCAAGTTCG（后面再补几个碱基吧，至少18个碱基配对啊，才9个，太抠了吧）
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
3楼2012-04-26 20:27:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 专家考核, 辛苦 2012-04-26 22:05:56
从A框也就是NcoI中的ATG开始翻译。
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-26 20:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Diacetyl

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-04-26 20:27:19:
有这么几个问题，
1，EcoRI 酶切位点是GAATTC,不是GAATCC，估计是手误。记得不要犯这种错误哦，不然引物合成出来，载体构建不成功都还知道是什么原因。
2，翻译是从载体上ATG开始的，即是你标记的A处，所以你的 ...

非常感谢给予的指正，现在明白怎样处理这样的问题了。
您第三点提到的 ATG是不是 可加可不加？
谢谢！
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-27 13:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
4楼: Originally posted by Diacetyl at 2012-04-27 13:43:19:
非常感谢给予的指正，现在明白怎样处理这样的问题了。
您第三点提到的 ATG是不是 可加可不加？
谢谢！

是的，可加可不加。
回复此楼
Thank-you，so-blue.
5楼2012-04-27 21:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307求调剂 +18 超级伊昂大王 2026-03-24 20/1000 2026-03-31 01:16 by BruceLiu320
[考研] 281求调剂 +5 亚克西good 2026-03-26 7/350 2026-03-30 20:42 by dophin1985
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +7 萝卜炖青菜 2026-03-28 8/400 2026-03-30 19:59 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +10 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 10/500 2026-03-30 18:34 by 544594351
[考研] 292求调剂 +13 是妍子也是研子 2026-03-30 13/650 2026-03-30 18:01 by 小徐0109
[考研] 286求调剂 +5 Faune 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:15 by 无际的草原
[考研] 310求调剂 +10 争取九点睡 2026-03-30 10/500 2026-03-30 16:45 by ztnimte
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 一志愿北京工业大学，324分求调剂 +6 零八# 2026-03-28 6/300 2026-03-29 21:20 by nanaliuyun
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-24 6/300 2026-03-29 20:45 by 无际的草原
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +11 nnnnnnn5 2026-03-25 11/550 2026-03-29 20:42 by 无际的草原
[考研] 压国家一区线，求导师收留，有恩必谢！ +7 迷人的哈哈 2026-03-28 7/350 2026-03-28 16:47 by 催化大白
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 339求调剂，想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭