应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS聚丙烯酰胺蛋白电泳 上样时蛋白样品从孔中飘出
301/3返回列表123下一页
查看: 6251  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

baier_1989

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS聚丙烯酰胺蛋白电泳 上样时蛋白样品从孔中飘出

我做的是肝脏提取的线粒体蛋白，和2X loading buffer混合煮沸，一上到孔中样品，就开始从孔里呈线状向上飘，一会就全浮到缓冲液里了，电泳后什么也跑不出来。奇怪的是我用的低标蛋白marker也飘出来了，（marker我也和2X loading buffer混合了，但没有煮沸）以前做过，没出现这情况。以前做的时候2X loading buffer是别人配好的的，这次是我新配的，蛋白样品是1月提取的，跑过一次胶后，就一直-70存着。
       是2X loading buffer的问题，还是蛋白已经降解了？有几个样品没有飘出，但是跑出来整个道都是，一个柱状，没有条带。胶应该没问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-17 22:15:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

东方龙飞

铜虫 (正式写手)
baier_1989: 回帖置顶 2012-06-04 19:09:17
分析下来，三个原因：
1、 你的样品孔做浓缩胶的时候有问题，所以导致样品进不去，一点样就漂，或者根本就压不下去。
2、 你的样品处理的有问题，也就是说loading buffer稀释倍数太多了，所以样品会漂。
3、 你的样品有问题，蛋白不够。因为即使是水+loading buffer，也还是会沉到底的。
赞一下(2人) 回复此楼
19楼2012-04-19 16:56:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mungbean3881

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
baier_1989: 金币+1, ★★★很有帮助, 是胶孔的问题 2012-06-04 19:06:48
是不是梳子孔里的游离胶没吹干净啊
赞一下(1人) 回复此楼
吃亏未必是祸，占便宜一定不是福
4楼2012-04-18 08:20:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baier_1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mungbean3881 at 2012-04-18 08:20:22:
是不是梳子孔里的游离胶没吹干净啊

有可能 请问您是怎么吹游离胶的 我原来用针挑过 效果不是很好
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-04-18 14:31:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dovekaoyan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
baier_1989: 回帖置顶 2012-06-04 19:09:11
胶孔没洗干净，我前两次也出现过这种现象，就是因为胶孔里面有碎胶，解决办法：插梳子、拔梳子时候要干脆利索，这样产生的碎胶少，洗胶孔时候用稍大一些的（如20ml容量）注射器洗涤，尽量使对胶孔的冲击力大一些，把碎胶都冲出来，再上样就好多了。
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2012-04-19 09:31:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

open3377

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
缓冲液问题吧，换下电泳缓冲液看看
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-17 23:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品缓冲液不是忘加甘油了吧
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-18 05:26:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baier_1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by open3377 at 2012-04-17 23:36:13:
缓冲液问题吧，换下电泳缓冲液看看

缓冲也是新配置的 5X甘氨酸缓冲液 应该没有问题吧
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-18 14:29:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baier_1989

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lzgxgz at 2012-04-18 05:26:10:
样品缓冲液不是忘加甘油了吧

甘油加了
回复此楼
6楼2012-04-18 14:30:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YZQ_XM

铜虫 (初入文坛)
应该是孔的问题吧
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-18 15:03:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！ 2012-04-18 18:18:29
这情况还真没出现过，再确定下是否加甘油了？
另外是否是开始电泳了才往出漂，如果是，检查下是否是电极接反了。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
9楼2012-04-18 16:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michellefree

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-19 13:45:04
以前也有一次这种情况，是把正负极接反了，这种情况下如果样品还在孔里面没有逸到缓冲液里的话，还可以换过电极接着跑。不过你这种一上样就往上飘，应该是因为样品的比重太小了，要么是你的样品缓冲液比重小，要么是你的跑胶缓冲液有问题，成分比例有问题吧。一般情况下只上样蛋白质Marker不会出现这种问题（蛋白质Marker一般很快就能落下并且在孔的底部不上飘），你加了样品缓冲液却飘了，最大的可能就是样品缓冲液有问题。建议重新配。
赞一下 回复此楼
10楼2012-04-18 20:09:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 baier_1989 的主题更新
301/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭