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baier_1989

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS聚丙烯酰胺蛋白电泳 上样时蛋白样品从孔中飘出

我做的是肝脏提取的线粒体蛋白,和2X loading buffer混合煮沸,一上到孔中样品,就开始从孔里呈线状向上飘,一会就全浮到缓冲液里了,电泳后什么也跑不出来。奇怪的是我用的低标蛋白marker也飘出来了,(marker我也和2X loading buffer混合了,但没有煮沸)以前做过,没出现这情况。以前做的时候2X loading buffer是别人配好的的,这次是我新配的,蛋白样品是1月提取的,跑过一次胶后,就一直-70存着。
       是2X loading buffer的问题,还是蛋白已经降解了?有几个样品没有飘出,但是跑出来整个道都是,一个柱状,没有条带。胶应该没问题。
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mungbean3881

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
baier_1989: 金币+1, ★★★很有帮助, 是胶孔的问题 2012-06-04 19:06:48
是不是梳子孔里的游离胶没吹干净啊
吃亏未必是祸,占便宜一定不是福
4楼2012-04-18 08:20:22
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open3377

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
缓冲液问题吧,换下电泳缓冲液看看
2楼2012-04-17 23:36:13
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品缓冲液不是忘加甘油了吧
3楼2012-04-18 05:26:10
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baier_1989

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by open3377 at 2012-04-17 23:36:13:
缓冲液问题吧,换下电泳缓冲液看看

缓冲也是新配置的 5X甘氨酸缓冲液 应该没有问题吧
5楼2012-04-18 14:29:10
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