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baier_1989

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS聚丙烯酰胺蛋白电泳 上样时蛋白样品从孔中飘出

我做的是肝脏提取的线粒体蛋白,和2X loading buffer混合煮沸,一上到孔中样品,就开始从孔里呈线状向上飘,一会就全浮到缓冲液里了,电泳后什么也跑不出来。奇怪的是我用的低标蛋白marker也飘出来了,(marker我也和2X loading buffer混合了,但没有煮沸)以前做过,没出现这情况。以前做的时候2X loading buffer是别人配好的的,这次是我新配的,蛋白样品是1月提取的,跑过一次胶后,就一直-70存着。
       是2X loading buffer的问题,还是蛋白已经降解了?有几个样品没有飘出,但是跑出来整个道都是,一个柱状,没有条带。胶应该没问题。
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dovekaoyan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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baier_1989: 回帖置顶 2012-06-04 19:09:11
胶孔没洗干净,我前两次也出现过这种现象,就是因为胶孔里面有碎胶,解决办法:插梳子、拔梳子时候要干脆利索,这样产生的碎胶少,洗胶孔时候用稍大一些的(如20ml容量)注射器洗涤,尽量使对胶孔的冲击力大一些,把碎胶都冲出来,再上样就好多了。
14楼2012-04-19 09:31:50
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