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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 激光共聚焦显微镜观察微生物菌落具体怎么操作？
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成龙

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 激光共聚焦显微镜观察微生物菌落具体怎么操作？ 已有1人参与

吸附到载玻片的微生物菌落，用共聚焦观察，通用的切片怎么做哈？求大家给点参考建议，谢谢啦，站内联系也行。
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激光共聚焦显微镜

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1楼 2012-04-17 18:17:50
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jiacunzhen

金虫 (正式写手)
湿态直接染色就行，完了用封片液封片，再用树胶封一下保存就行，很简单
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

成龙
8楼2012-05-26 22:19:00
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普通回帖

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
关键看你要看什么



------------------------------------------------------------
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致良知
2楼2012-04-18 08:52:04
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成龙

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by quiller2000 at 2012-04-18 08:52:04:
关键看你要看什么



------------------------------------------------------------

就是想通过共聚焦观察得到微生物菌落中的诸如蛋白，多糖这些的分布情况，以前没接触过，恳请帮忙
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3楼2012-04-18 09:47:39
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857: 金币+1, 欢迎交流^_^ 2012-05-26 23:22:19
如果你想观察的是细胞间的物质，而且是出于菌落中的，那你不需要用confocal,可以看看用多糖的染料或特异性的蛋白质的染料染色后，用解剖镜或正置看看。confocal一般是倒置的，要求你必须做片子，而你的材料用一压，一定就变形了。看不到你所需要的菌落状态下细胞-细胞间的物质的分布和丰度。

另外，你要考虑染料或者探针的问题。PS，为什么不直接分离呢？
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致良知
4楼2012-04-18 10:01:16
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yushenye

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 欢迎交流^_^ 2012-05-26 23:22:24
如果看单个菌细胞，可以不做切片，培养后直接固定，透化，染色
如果看菌落之间的和单个细胞的东西，那得要像普通的免疫组化一样做
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Intheway,Onmyway
5楼2012-04-19 09:34:13
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成龙

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yushenye at 2012-04-19 09:34:13:
如果看单个菌细胞，可以不做切片，培养后直接固定，透化，染色
如果看菌落之间的和单个细胞的东西，那得要像普通的免疫组化一样做

我想观察水处理中微生物生物膜的物质分布，大概膜厚大几十到一百个微米，通过染色观察蛋白质，多糖这些分布情况，微生物生长在载玻片上形成生物膜。其实想做切片的目的是我怕生物膜比较厚的话下层物质很难被探针标记到，我主要是想通过观察得到物质分布的三维结构，通过构建生物膜的一个立体的结构，得到他的空隙分布情况。针对我这种情况，您能给我一个从取样到上镜一系列过程的参考吗？多谢啦！我不是学这方面的，只是想得到分布结果所以前面的不得不去做，还请您多耐心的帮助.
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6楼2012-04-19 15:53:49
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desertgrow

银虫 (小有名气)
楼主找到方法了吗？
我做与你相关的，也在找方法，我觉得应该固定一下，不然跟有虫友说的用盖玻片一盖 生物膜就被压了 结构就破坏了
另外怎么能看到三维结构呢？
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7楼2012-05-08 10:59:06
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成龙

至尊木虫 (职业作家)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by jiacunzhen at 2012-05-26 22:19:00
湿态直接染色就行，完了用封片液封片，再用树胶封一下保存就行，很简单

谢谢
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9楼2012-05-26 22:20:18
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yushenye

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 成龙 at 2012-04-19 15:53:49
我想观察水处理中微生物生物膜的物质分布，大概膜厚大几十到一百个微米，通过染色观察蛋白质，多糖这些分布情况，微生物生长在载玻片上形成生物膜。其实想做切片的目的是我怕生物膜比较厚的话下层物质很难被探针标 ...

呵呵，其实你以“细菌”“生物膜”“免疫荧光”来搜索英文文献，应该可以找到，试试吧，
不行再问我
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Intheway,Onmyway
10楼2012-06-11 14:30:47
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