7楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-17 10:58:34:
正在尝试，蓝白斑做的只有白斑，所以囧了

11楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-17 17:12:02:
挑了好几个，都不是很好，不过我的PCR 产物都放了段时间，没有立即做连接，可以考虑一下

34楼: Originally posted by to-be at 2012-04-19 18:20:24:
1. 请楼主阅读使用Taq酶的说明书，看是否加A。
2.连接T的体系中PCR产物的浓度很重要，回收后要检测在再用。
3.检测手段的问题，扩不出菌液PCR可以怀疑引物的问题，体系的问题，因为没有对照。可以将克隆摇起来提 ...

33楼: Originally posted by 另一个天堂 at 2012-04-19 16:48:19:
1.蓝白斑筛选中平板问题  有没有加X-gal
2.感受态细胞问题  有没有失活，化学转化还是电转
3.T载体连接问题  连接时间，温度

31楼: Originally posted by 跳跳鱼 at 2012-04-19 15:35:13:
怎么会这样  那你的转化效率也太高了  不可能

35楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-19 18:24:18:
引物没有问题，不过可以试试提质粒然后酶切
他们说说明书说的时间太短，1000bp得连接过夜，我的只连接了半个小时，呜呜

38楼: Originally posted by to-be at 2012-04-19 18:31:21:
不知道楼主的质粒和片段大小，如果很相近的，可以适当调整连接体系比例。

5楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-17 10:30:17
pMD19-T载体，是宝生物的，16度保温30分钟，应该对着呢...