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TA克隆为什么总是假阳性啊?
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kabuqinuo89
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]
TA克隆为什么总是假阳性啊?
已有1人参与
我这一阵在做TA克隆,切胶回收的片段条带很清晰,但是每次连接都是假阳性或者是连不上,这是什么原因呢,求助啊!
切胶回收后的条带
第二个孔为目的条带,后面为菌落PCR结果,求解
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1楼
2012-04-16 16:20:18
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to-be
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【答案】应助回帖
★
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kabuqinuo89: 金币+1
2012-04-19 18:24:25
1. 请楼主阅读使用Taq酶的说明书,看是否加A。
2.连接T的体系中PCR产物的浓度很重要,回收后要检测在再用。
3.检测手段的问题,扩不出菌液PCR可以怀疑引物的问题,体系的问题,因为没有对照。可以将克隆摇起来提质粒,看大小,或者酶切,都可以验证是否连接成功。
4.其他操作按照说明书操作即可,同时确定药品都没有问题。
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生活是面镜子~
34楼
2012-04-19 18:20:24
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zhang8826857
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【答案】应助回帖
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2012-04-16 21:22:42
kabuqinuo89: 金币+1
2012-04-17 17:14:11
你有没有做一步加A的操作呀?
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好孩子!
2楼
2012-04-16 18:18:52
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kabuqinuo89
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专业: 生物信息学
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2楼
:
Originally posted by
zhang8826857
at 2012-04-16 18:18:52:
你有没有做一步加A的操作呀?
我是用的Taq酶,应该不用再加A吧,不过我打算明天再加一下A试试
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3楼
2012-04-16 21:30:43
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zhang8826857
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3楼
:
Originally posted by
kabuqinuo89
at 2012-04-16 21:30:43:
我是用的Taq酶,应该不用再加A吧,不过我打算明天再加一下A试试
哦,用的taq酶呀,那就不用加A啦。可能是连接的时间不够?而且连接的温度不能高于25度,你用的是什么T载体?takara的吗?
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好孩子!
4楼
2012-04-16 22:57:26
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