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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

[求助] TA克隆为什么总是假阳性啊?已有1人参与

我这一阵在做TA克隆,切胶回收的片段条带很清晰,但是每次连接都是假阳性或者是连不上,这是什么原因呢,求助啊!

切胶回收后的条带



第二个孔为目的条带,后面为菌落PCR结果,求解
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kabuqinuo89: 金币+1 2012-04-19 18:24:25
1. 请楼主阅读使用Taq酶的说明书,看是否加A。
2.连接T的体系中PCR产物的浓度很重要,回收后要检测在再用。
3.检测手段的问题,扩不出菌液PCR可以怀疑引物的问题,体系的问题,因为没有对照。可以将克隆摇起来提质粒,看大小,或者酶切,都可以验证是否连接成功。
4.其他操作按照说明书操作即可,同时确定药品都没有问题。
生活是面镜子~
34楼2012-04-19 18:20:24
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 欢迎斑斑常来啊~ 2012-04-16 21:22:42
kabuqinuo89: 金币+1 2012-04-17 17:14:11
你有没有做一步加A的操作呀?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好孩子!
2楼2012-04-16 18:18:52
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-04-16 18:18:52:
你有没有做一步加A的操作呀?

我是用的Taq酶,应该不用再加A吧,不过我打算明天再加一下A试试
3楼2012-04-16 21:30:43
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-16 21:30:43:
我是用的Taq酶,应该不用再加A吧,不过我打算明天再加一下A试试

哦,用的taq酶呀,那就不用加A啦。可能是连接的时间不够?而且连接的温度不能高于25度,你用的是什么T载体?takara的吗?
好孩子!
4楼2012-04-16 22:57:26
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