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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

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[求助] TA克隆为什么总是假阳性啊？已有1人参与

我这一阵在做TA克隆，切胶回收的片段条带很清晰，但是每次连接都是假阳性或者是连不上，这是什么原因呢，求助啊！

切胶回收后的条带

第二个孔为目的条带，后面为菌落PCR结果，求解

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1楼 2012-04-16 16:20:18

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to-be

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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kabuqinuo89: 金币+1 2012-04-19 18:24:25

1. 请楼主阅读使用Taq酶的说明书，看是否加A。
2.连接T的体系中PCR产物的浓度很重要，回收后要检测在再用。
3.检测手段的问题，扩不出菌液PCR可以怀疑引物的问题，体系的问题，因为没有对照。可以将克隆摇起来提质粒，看大小，或者酶切，都可以验证是否连接成功。
4.其他操作按照说明书操作即可，同时确定药品都没有问题。