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植物园园长

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用天根的零背景快速克隆载体吧,5分钟连接,阳性率据称95%以上,我们实验室用的很不错。
在路上~~Marketing!
21楼2012-04-18 09:19:56
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zth123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定一下你检测用引物是正确的,有可能是检测时有问题。pMD19-T好像是M13F&R
22楼2012-04-18 09:27:09
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by open3377 at 2012-04-17 23:27:40:
1. 用普通TAQ酶,别浪费功夫加什么A
2. 做个对照
3.检查下抗生素,板超过24h,长出来的就别要了
4. 向别人借过感受态 试试
5.PCR检测至少3遍才能确定吧,即使有,也可能扩不何处来
6. 使用载体引物,你胶上乱 ...

谢谢  我得好好找找原因,有点头疼
23楼2012-04-18 10:58:03
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
20楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-04-18 08:51:24:
T载体可能有问题。我以前也碰到过,用了一个公司的T载体,自连很严重,后来索性换了另一种T载体,就一次成功了。
换一种T载体试试。

这个 新买的载体 宝生物的  
24楼2012-04-18 10:58:40
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tosay7319

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-17 10:30:17:
pMD19-T载体,是宝生物的,16度保温30分钟,应该对着呢

30分钟?我用18-T或20-T,一般都过夜的,最少也是三个小时,效果还不错。
一个人最大的幸福不是喜欢什么就做什么,而是做什么就喜欢什么-.-
25楼2012-04-18 11:02:14
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-18 18:09:15
这和T载体新不新没有关系,质量好的T载体要求自连率很低,一般小于5%。我那时也是用的新买的载体,但也是始终是假阳性。没办法,换了一家公司的,一次成功。
26楼2012-04-18 12:25:15
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-04-18 12:25:15:
这和T载体新不新没有关系,质量好的T载体要求自连率很低,一般小于5%。我那时也是用的新买的载体,但也是始终是假阳性。没办法,换了一家公司的,一次成功。

那你后来换的是哪个公司的啊
27楼2012-04-18 15:19:18
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by gywyl1977 at 2012-04-18 12:25:15:
这和T载体新不新没有关系,质量好的T载体要求自连率很低,一般小于5%。我那时也是用的新买的载体,但也是始终是假阳性。没办法,换了一家公司的,一次成功。

那你后来换的是哪个公司的啊
28楼2012-04-18 15:19:27
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gywyl1977

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1年多前的事了,只记得是国外的牌子。
29楼2012-04-18 15:58:42
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steler_ly

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
16°连接过夜,多挑克隆做菌落PCR..
30楼2012-04-19 09:20:22
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