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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blot实验技术
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sunxiao1987

新虫 (初入文坛)

[求助] western blot实验技术

刚开始煮蛋白会起泡泡,溢出正常么？还有我的目的蛋白是75KD我250mA的电流转膜一个半小时可以将目的蛋白转过去么？显影的时候我的内参条带很好，但是目的蛋白没有，是什么原因？
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1楼 2012-04-14 13:38:55
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-05-20 18:33:47
有没有可能是抗体失效，稀释得太稀，或者蛋白的表达量不够？显影液使用太久效果也会变差
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12楼2012-05-19 23:05:09
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-20 18:33:55
sunxiao1987: 金币+36, ★有帮助 2012-05-24 14:30:07
多克隆抗体的特异性确实会差一些，但只要是蛋白上样量足够的话应该还是会显出比较深的条带的。试试优化一下孵育抗体和清洗的时间吧
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14楼2012-05-20 10:16:57
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