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载体总是连不上，已经一个月了~真心求助，详细在帖子里
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我用的是Petduet的载体，选用的是bamHI和Xhol的酶切位点，载体双酶切过，用以前的酶切产物链接并做了菌液PCR-MIx鉴定，是连上的，说明载体是挺好用的。 我需要连接一个1500bp的目的片段，也是B/X的酶切位点，可是试了很多次，菌液PCR几乎都没有阳性的克隆。平板上长的克隆也比较少，一般就三四个。 酶切体系40ul PCR产物 20ul 10 X H 4ul BamhI 1.5ul XholI 1.5ul ddH2O 13ul 酶切6~8小时，连接体系8ul，按照TAKARA 的 Solution I 说明书来连。 1个月了，还是没有构建成功。求助！很着急！  PetDuet-1 |
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7楼2012-04-15 21:29:54