| 查看: 2452 | 回复: 8 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
laverne铜虫 (小有名气)
|
[交流]
蛋白突变后不表达了 已有4人参与
|
|||
|
大家好，我现在实验遇到个现象，苦恼ing，烦请大家给予指点 定点突变蛋白之后，在bl21中不表达了，尝试各种优化，没有效果，有人能解释这是什么原因吗？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有200人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 点突变后蛋白结构变化预测
已经有18人回复
- 用什么技术突变蛋白质的某个氨基酸。
已经有20人回复
- 氨基酸序列的点突变是否引起该蛋白的功能变化
已经有3人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母表达胞外蛋白，sds电泳后看不到条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
已经有41人回复
laverne
铜虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 49.1
- 散金: 20
- 帖子: 62
- 在线: 19.7小时
- 虫号: 709476
- 注册: 2009-02-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2012-04-10 16:44:46
dreamofyou
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 774.5
- 帖子: 175
- 在线: 64.4小时
- 虫号: 668914
- 注册: 2008-12-05
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2012-04-20 16:38:53
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 应助指数+1, 果然专业！ 2012-04-23 18:50:33
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 应助指数+1, 果然专业！ 2012-04-23 18:50:33
|
一般来讲，先确定新的启动子存在且有效，其次确定起始转录位点存在且有效，然后有软件模拟一下mRNA突变后是否构成了二级结构，是否有移码突变，是否构成了稀有密码子，是否提前中断翻译，再有考虑突变产物蛋白质是否构成新的酶切位点和是否在三维结构上发生了折叠异常（引入突变位点也是研究蛋白质折叠的一种常规实验技术）。 还要考虑突变产物蛋白质是不是参与形成了原来没有的超分子结构（聚合体）或者影响了原有的四级结构的形成。 |
4楼2012-04-20 17:13:50
laverne
铜虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 49.1
- 散金: 20
- 帖子: 62
- 在线: 19.7小时
- 虫号: 709476
- 注册: 2009-02-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2012-04-23 18:48:37
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
一般来说，由于真核生物细胞中的由于存在翻译起始因子eIF4A,eIF4B在核糖体翻译时去除mRNA的二级结构，所以只要不是很大的二级结构改变一般不至于影响翻译过程。你可以检测一下工程细胞中翻译起始因子eIF4A,eIF4B是否都正常表达，若没有足量的eIF4A，那么mRNA的二级结构二级结构改变可能足以引起表达障碍，若没有足量的eIF4B，那么eIF4A足量表达eIF4A的效率也会很低。 另外，我觉得你该查一下工程细胞的目的蛋白质突变后是不是影响了它与别的蛋白质或DNA特异性片段之间的专一性结合，比如说它原本与某种转录因子又结合，但是突变后使该结合失效。 |
6楼2012-04-23 22:10:03
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
7楼2012-04-23 22:17:58
8楼2012-09-20 20:26:48
9楼2016-09-27 16:51:52
20