应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白突变后不表达了
51/1返回列表
查看: 2444  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

laverne

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白突变后不表达了 已有4人参与

大家好，我现在实验遇到个现象，苦恼ing，烦请大家给予指点
定点突变蛋白之后，在bl21中不表达了，尝试各种优化，没有效果，有人能解释这是什么原因吗？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
为了更好的生活……
1楼 2012-04-10 16:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 应助指数+1, 果然专业！ 2012-04-23 18:50:33
一般来讲，先确定新的启动子存在且有效，其次确定起始转录位点存在且有效，然后有软件模拟一下mRNA突变后是否构成了二级结构，是否有移码突变，是否构成了稀有密码子，是否提前中断翻译，再有考虑突变产物蛋白质是否构成新的酶切位点和是否在三维结构上发生了折叠异常（引入突变位点也是研究蛋白质折叠的一种常规实验技术）。

还要考虑突变产物蛋白质是不是参与形成了原来没有的超分子结构（聚合体）或者影响了原有的四级结构的形成。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-04-20 17:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

dreamofyou

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个很正常吧，有的本来表达很好，突变了一个氨基酸表达差很多。
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-20 16:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

laverne

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-04-20 17:13:50:
一般来讲，先确定新的启动子存在且有效，其次确定起始转录位点存在且有效，然后有软件模拟一下mRNA突变后是否构成了二级结构，是否有移码突变，是否构成了稀有密码子，是否提前中断翻译，再有考虑突变产物蛋白质是 ...

谢谢您的意见！
首先，蛋白突变只发生在c端（原始的蛋白表达量还可以），不涉及启动子以及转录起始位点的变化。
其次，测序结果认真查看了没有发生移码，也没有终止密码子提前形成。
另外，想要跟您请教的是：
我用软件模拟了mRNA突变后的二级结构，看上去是发生了挺大的改变。但是我不知道这个模拟结果该如何分析？您是否可以给些意见？
从自由能来看，原始的是－229kkal/mol, 突变后是－200kkal/mol
ps:由于目标蛋白带有his标签，纯化后完全木有东西，所以没法考虑聚合体形成的问题。
赞一下 回复此楼
为了更好的生活……
5楼2012-04-23 18:48:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by laverne at 2012-04-23 18:48:37:
谢谢您的意见！
首先，蛋白突变只发生在c端（原始的蛋白表达量还可以），不涉及启动子以及转录起始位点的变化。
其次，测序结果认真查看了没有发生移码，也没有终止密码子提前形成。
另外，想要跟您请教的是： ...

一般来说，由于真核生物细胞中的由于存在翻译起始因子eIF4A,eIF4B在核糖体翻译时去除mRNA的二级结构，所以只要不是很大的二级结构改变一般不至于影响翻译过程。你可以检测一下工程细胞中翻译起始因子eIF4A,eIF4B是否都正常表达，若没有足量的eIF4A，那么mRNA的二级结构二级结构改变可能足以引起表达障碍，若没有足量的eIF4B，那么eIF4A足量表达eIF4A的效率也会很低。
另外，我觉得你该查一下工程细胞的目的蛋白质突变后是不是影响了它与别的蛋白质或DNA特异性片段之间的专一性结合，比如说它原本与某种转录因子又结合，但是突变后使该结合失效。
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-23 22:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +4 Liwangman 2026-03-15 4/200 2026-03-16 08:01 by wang_dand
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭