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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白突变后不表达了
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laverne

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白突变后不表达了 已有4人参与

大家好，我现在实验遇到个现象，苦恼ing，烦请大家给予指点
定点突变蛋白之后，在bl21中不表达了，尝试各种优化，没有效果，有人能解释这是什么原因吗？
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为了更好的生活……
1楼 2012-04-10 16:32:58
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laverne

铜虫 (小有名气)
谢谢楼上！
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为了更好的生活……
2楼2012-04-10 16:44:46
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laverne

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-04-20 17:13:50:
一般来讲，先确定新的启动子存在且有效，其次确定起始转录位点存在且有效，然后有软件模拟一下mRNA突变后是否构成了二级结构，是否有移码突变，是否构成了稀有密码子，是否提前中断翻译，再有考虑突变产物蛋白质是 ...

谢谢您的意见！
首先，蛋白突变只发生在c端（原始的蛋白表达量还可以），不涉及启动子以及转录起始位点的变化。
其次，测序结果认真查看了没有发生移码，也没有终止密码子提前形成。
另外，想要跟您请教的是：
我用软件模拟了mRNA突变后的二级结构，看上去是发生了挺大的改变。但是我不知道这个模拟结果该如何分析？您是否可以给些意见？
从自由能来看，原始的是－229kkal/mol, 突变后是－200kkal/mol
ps:由于目标蛋白带有his标签，纯化后完全木有东西，所以没法考虑聚合体形成的问题。
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为了更好的生活……
5楼2012-04-23 18:48:37
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