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laverne

铜虫 (小有名气)

[交流] 蛋白突变后不表达了已有4人参与

大家好,我现在实验遇到个现象,苦恼ing,烦请大家给予指点
定点突变蛋白之后,在bl21中不表达了,尝试各种优化,没有效果,有人能解释这是什么原因吗?
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为了更好的生活……
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laverne

铜虫 (小有名气)

谢谢楼上!
为了更好的生活……
2楼2012-04-10 16:44:46
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laverne

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-04-20 17:13:50:
一般来讲,先确定新的启动子存在且有效,其次确定起始转录位点存在且有效,然后有软件模拟一下mRNA突变后是否构成了二级结构,是否有移码突变,是否构成了稀有密码子,是否提前中断翻译,再有考虑突变产物蛋白质是 ...

谢谢您的意见!
首先,蛋白突变只发生在c端(原始的蛋白表达量还可以),不涉及启动子以及转录起始位点的变化。
其次,测序结果认真查看了没有发生移码,也没有终止密码子提前形成。
另外,想要跟您请教的是:
我用软件模拟了mRNA突变后的二级结构,看上去是发生了挺大的改变。但是我不知道这个模拟结果该如何分析?您是否可以给些意见?
从自由能来看,原始的是-229kkal/mol, 突变后是-200kkal/mol
ps:由于目标蛋白带有his标签,纯化后完全木有东西,所以没法考虑聚合体形成的问题。
为了更好的生活……
5楼2012-04-23 18:48:37
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