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mch502

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE蛋白质电泳,电泳迁移率只与分子量相关吗?

请问各位,SDS-PAGE蛋白质电泳中电泳迁移率只与分子量相关吗?
我的试验中对牛血清白蛋白(BSA)进行改性,用乙二胺与BSA上面的羧基(-COOH)反应,让BSA只带有氨基(-NH2),同时BSA的分子量会增大。已经用化学法测得改性后的BSA游离氨基数目,最近做SDS-PAGE鉴定蛋白质时,不止一次发现分子量大的改造后的BSA条带反倒是比原始BSA向前迁移的距离多,Maker显示分子量还比未改造的BSA低。本实验室的另一同学也得出相同的相反结果。请问,这一现象怎么解释啊?
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DA_huyang

新虫 (初入文坛)

PAGE原理:
据有无浓缩效应可将电泳分为两类:
  
  连续系统:缓冲液pH值、凝胶浓度相同,带电粒子靠电荷及分子筛效应区分。
  不连续系统:缓冲离子成分、 pH值、凝胶浓度不同,带电粒子在电场中由电 荷效应、 分子筛效应、浓缩效应区分。


而我们常用的有分离胶和浓缩胶组成 ,应该是指 不连续系统  这样 主要靠电荷效应 分子筛效应和浓缩效应来区分
期待变成大虫
8楼2012-04-17 22:06:52
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mch502: 金币+1, 有帮助, 谢谢。我们的想法也一样。 2012-04-17 11:55:12
SDS-PAGE的原理是SDS(带负电)和蛋白按照固定的比例结合,并将蛋白完全变性。楼主的实验中,乙二胺是不是带了负电荷?这样似的蛋白比原蛋白带了更多的负电荷而分子量增加并不多,结果就是在电场中迁移的更快。
对楼主的实验不熟悉,纯属个人想法,有错误请指正。
2楼2012-04-09 11:27:37
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快乐女孩h

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mch502: 金币+1, 有帮助, 我们也觉得是电荷的问题。 2012-04-17 11:55:41
我觉得应该也是电荷的问题
其实越简单的生活越幸福
3楼2012-04-09 21:48:51
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mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mch502: 金币+1, 有帮助, pH是在4-6之间。linker和乙二胺已经被除去了。我正在重新跑电泳。 2012-04-17 11:56:52
你这个反映估计是在pH4-6之间反应的吧,另外存在大量的linker和乙二胺,超滤一下再跑个看看
4楼2012-04-10 13:22:32
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