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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE蛋白质电泳，电泳迁移率只与分子量相关吗？
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mch502

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE蛋白质电泳，电泳迁移率只与分子量相关吗？

请问各位，SDS-PAGE蛋白质电泳中电泳迁移率只与分子量相关吗？
我的试验中对牛血清白蛋白（BSA）进行改性，用乙二胺与BSA上面的羧基(-COOH)反应，让BSA只带有氨基(-NH2)，同时BSA的分子量会增大。已经用化学法测得改性后的BSA游离氨基数目，最近做SDS-PAGE鉴定蛋白质时，不止一次发现分子量大的改造后的BSA条带反倒是比原始BSA向前迁移的距离多，Maker显示分子量还比未改造的BSA低。本实验室的另一同学也得出相同的相反结果。请问，这一现象怎么解释啊？
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1楼 2012-04-08 22:34:42
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mch502: 金币+1, ★有帮助, 谢谢。我们的想法也一样。 2012-04-17 11:55:12
SDS-PAGE的原理是SDS（带负电）和蛋白按照固定的比例结合，并将蛋白完全变性。楼主的实验中，乙二胺是不是带了负电荷？这样似的蛋白比原蛋白带了更多的负电荷而分子量增加并不多，结果就是在电场中迁移的更快。
对楼主的实验不熟悉，纯属个人想法，有错误请指正。
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2楼2012-04-09 11:27:37
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bilibi

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mch502: 金币+1, ★★★很有帮助, 多谢！起初我也觉得是电荷的问题。后来多跑了两次电泳，看出了差别，发现应该是蛋白质降解了。 2012-04-17 11:58:22
蛋白可能被降解了，Pharmaceutical Research
Volume 25, Number 11, 2534-2544, DOI: 10.1007/s11095-008-9670-8
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5楼2012-04-10 20:36:10
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DA_huyang

新虫 (初入文坛)
所以我感觉 楼主 的问题应该是和  电荷效应 主要相关
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期待变成大虫
9楼2012-04-17 22:08:35
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普通回帖

快乐女孩h

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mch502: 金币+1, ★有帮助, 我们也觉得是电荷的问题。 2012-04-17 11:55:41
我觉得应该也是电荷的问题
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其实越简单的生活越幸福
3楼2012-04-09 21:48:51
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mssj300130

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mch502: 金币+1, ★有帮助, pH是在4-6之间。linker和乙二胺已经被除去了。我正在重新跑电泳。 2012-04-17 11:56:52
你这个反映估计是在pH4-6之间反应的吧，另外存在大量的linker和乙二胺，超滤一下再跑个看看
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4楼2012-04-10 13:22:32
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liukun261

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
mch502: 金币+1, 好的 谢谢！ 2012-04-17 11:58:38
本帖内容被屏蔽
6楼2012-04-11 12:18:17
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DA_huyang

新虫 (初入文坛)
SDS——PAGE  中蛋白的迁移率不仅和分子量有关，

单体丙烯酰胺(Acr)             +     催化剂(AP)          聚合= 三维网孔结构(凝胶）
  N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)          加速剂(TEMED）


而以此为支持物的的电泳为聚丙烯酰胺凝胶电泳
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期待变成大虫
7楼2012-04-17 22:02:10
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DA_huyang

新虫 (初入文坛)
PAGE原理：
据有无浓缩效应可将电泳分为两类：
  
  连续系统：缓冲液pH值、凝胶浓度相同，带电粒子靠电荷及分子筛效应区分。
  不连续系统：缓冲离子成分、 pH值、凝胶浓度不同，带电粒子在电场中由电 荷效应、 分子筛效应、浓缩效应区分。


而我们常用的有分离胶和浓缩胶组成 ，应该是指 不连续系统  这样 主要靠电荷效应 分子筛效应和浓缩效应来区分
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期待变成大虫
8楼2012-04-17 22:06:52
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mch502

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by DA_huyang at 2012-04-17 22:02:10:
SDS——PAGE  中蛋白的迁移率不仅和分子量有关，

单体丙烯酰胺(Acr)             +     催化剂(AP)          聚合= 三维网孔结构(凝胶）
  N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)          加速剂(TEMED）


而以此为支 ...

谢谢您的回复。不过我不明白您的意思。SDS—PAGE  中蛋白的迁移率不仅和分子量有关，那其他影因素呢？我不懂给你后面的意思。
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10楼2012-04-18 10:58:03
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